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MBOII

 
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描述:

限制酶反应条件

具有100%活性的推荐缓冲液 优化的反应温度 Enzyme activity in Thermo Scientific buffers, % Tango™ 缓冲液 : 双酶切
B (蓝色)
1X
G (绿色)
1X
O (橙色)
1X
R (红色)
1X
Tango™ (黄色)
1X / 2X
B 37°C 100 50-100 20-50 0-20 50-100 20-50 1X or 2X
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液B:
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。


 

保存缓冲液
MboII保存在:
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。


 

连接和重新酶切
5倍MboII过量酶切后,超过80%的酶切产物可连接(连接体系:20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg DNA,10% PEG),超过80%的连接产物能重新酶切。


 

商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。


 

双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。


 

甲基化影响
Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。


甲基化类型 序列 切割效果
Dam (GATC)

5'...GAAGm6A TC...3'
3'...CTTC Tm6AG...5'

阻止酶切
CpG

5'...m5C GAAGA...3'
3'... Gm5CTTCT...5'

不阻止酶切
EcoBI (TGA(N)8TGCT)

5'...TGm6AAGA(N)5 TGCT...3'
3'...AC TTCT(N)5m6ACGA...5'

不阻止酶切

识别位点靠近PCR片段末端时的酶切效率

识别位点距离片段末端的碱基数
1 2 3 4 5
50-100

DNA 分子中识别位点的数量

Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
130 11 11 11 7 8
pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
9 9 8 8 15 11


注意事项:

  • 底物为λ DNA (dam-) (#SD0021)。
  • 重叠的Dam甲基化抑制MboIII酶切。为了避免Dam甲基化的影响,样本DNA需要从dam-, dcm-菌株中抽提,如GM2163 (#M0099)。
  • 超过15倍过量酶切会导致星活性。
  • MboII切割后的DNA片段含有3’端单碱基突出,连接时比平末端困难。
  • MboII可能会吸附在切割的DNA分子上,从而改变DNA条带的电泳纯移率。为了避免出现非正常条带,上样电泳前,建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本,或者在 DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。


 


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参考文献

本产品可用于的实验

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