McrBC

• 产品编号：M0272L      品牌：New England Biolabs       原厂货号：M0272L
• 产品分类：克隆 > 限制性内切酶和连接酶 > 限制性内切酶 > M
• 应用分类：

描述：

特性

■  测定 CpG 二核苷酸的甲基化状态
■  测定胞嘧啶甲基化的 DNA
 

概述

McrBC 是一种核酸内切酶，能够切割含有甲基胞嘧啶*的单链或双链 DNA。对未甲基化的 DNA 不起作用。DNA 上 McrBC 的识别位点由两个 (G/A) ^mC 形式的半位点组成，这两个半位点之间的距离可以达到 3 kb，但是最佳的距离为 55–103 bp。McrBC 的切割需要 GTP，但是在存在不可水解的 GTP 的类似物时，该酶可以特异地结合到甲基化 DNA 上，但不能进行切割。McrBC 作用于一对 Pu^mCG 序列元件，以此检测高比例甲基化的 CpGs，但是 McrBC 不能识别内部胞嘧啶甲基化了的 HpaII/MspI 位点 (CCGG) 。
 

*5-甲基胞嘧啶，5-羟甲基胞嘧啶或者 N4-甲基胞嘧啶。

来源

两种组成蛋白分别纯化自含有编码 McrB 和 McrC 质粒的大肠杆菌 K-12 菌株。

反应条件

NEBuffer 2 + BSA + GTP。37℃ 温育。

随酶提供的试剂

10X NEBuffer 2
100X BSA
100X GTP (100 mM)
对照质粒 DNA

质保声明

无核酸内切及外切酶污染。

单位定义

1 单位指在 50 μl 反应体系中，37℃ 1 小时切割含有多个 McrBC 位点的质粒所需要的酶量。切割基因组 DNA 时，建议对 McrBC 进行试验性梯度测定。

浓度

10,000 units/ml。

热失活

65℃ 20 分钟。

原厂资料：

注意事项：

McrBC 在每对半位点之间切割一次，切割位点靠近某一个半位点，但是通常距最近的甲基化碱基大约 30 bp。因此，当 DNA 中存在多个 McrBC 半位点时 (例如胞嘧啶甲基化基因组 DNA) ,识别序列的可变性导致位点重叠，产生弥散状而不是细窄的条带。