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β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21)的英文名是β-glucosidase,属于水解酶类,又称β-D-葡萄糖苷水解酶,别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶。它可催化水解结合于末端非还原性的β-D-糖苷键,同时释放出配基与葡萄糖体。
β-葡萄糖苷酶的活性测定方法很多,常见反应底物有对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)、纤维二糖、水杨苷 4-甲基伞形酮β-D-葡萄糖苷等。
1.分光光度计法:它以水杨苷作底物,将水杨苷裂解为水杨醇和葡萄糖,然后将酶解产物中的水杨醇用4-氨基安替比林显色,再用分光光度法比色测定;或者对所产生的葡萄糖用DNS试剂显色后进行比色测定;也可用熊果苷(β-葡萄苷-对苯二酚)作为底物,对产生的葡萄糖可用碘量法加以测定。
2.荧光法:用4-甲基伞形酮β-D-葡萄糖苷作为底物,经β-葡萄糖苷酶作用,专一地分解为4-甲基伞形酮,利用伞形酮(7-羟基香豆素)与4-甲基伞形酮具强烈荧光的特点,通过测定酶解游离出的4-甲基伞形酮的荧光吸光度来计算酶的活性。
比色法,以对硝基苯基β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物进行酶解,底物水解后释放出来的对硝基苯酚在400~420nm可见光范围内有特征吸收峰,可直接在400~420nm之间比色测定。
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