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原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术,就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。
原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞,又能标出靶序列在细胞内的位置,于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。
大致过程
实验用的标本是新鲜组织、石蜡包埋组织、脱落细胞、血细胞等。其基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞,蛋白酶消化处理组织;在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增,覆盖并加液体石蜡后,在原位PCR仪上进行PCR循环扩增,PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交,最后显微镜观察结果。
应用范围:
(1)检测外源性基因片段,提高检出率,集中在病毒感染的检查上,如HIV、HPV、HBV、CMV等;
(2)观察病原体在体内分布规律
(3)内源性基因片段,如人体的单基因病、重组基因、易位的染色体、Ig的mRNA片段、癌基因片段等。(4)检测导入基因;
(5) 遗传病基因检测如β-地中海贫血
与PCR的区别
PCR:提取细胞或组织中的DNA进行基因扩增反应
原位PCR:保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增,不但可以检测到靶DNA,而且还可以了解靶DNA存在于何种细胞中,更有利于探讨靶DNA与细胞之间的关系。
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