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GSH/GSSG-Glo? Assay

 
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Passive Lysis Buffer, 5X【子货号:E194B,包装:1 x 1ml,,运保温度:–20°C】
DTT【子货号:P117B,包装:1 x 250μl,,运保温度:–20°C】
Reconstitution Buffer with esterase【子货号:V144A,包装:1 x 10ml,,运保温度:–20°C】
Glutathione Reaction Buffer【子货号:V163A,包装:1 x 10ml,,运保温度:–20°C】
NEM, 25mM【子货号:V164A,包装:1 x 50μl,,运保温度:–20°C】
Luciferin-NT【子货号:V687A,包装:1 x 100μl,,运保温度:–20°C】
Glutathione S-Transferase【子货号:V689B,包装:1 x 500μl,,运保温度:–20°C】
Glutathione, 5mM【子货号:V690A,包装:1 x 100μl,,运保温度:–20°C】
Luciferin Detection Reagent【子货号:V859A,包装:1 x 1 each,,运保温度:–20°C】


描述:

说明

 

GSH/GSSG-GloTM Assay (GSH/GSSG-GloTM 检测试剂盒) 是利用发光法检测和定量培养细胞中的总谷胱甘肽(GSH+GSSG)、GSSG以及GSH/GSSG 比率的检测系统。GSH 水平的改变对细胞毒性反应的评价非常重要,并且是氧化应激的重要指标,可能引起细胞凋亡或细胞死亡。该试剂盒提供了一种简单的多孔板模式,稳定的发光信号直接与培养孔中样品的总谷胱甘肽(GSH+GSSG) 或GSSG 的浓度相关联。总谷胱甘肽和GSSG 的检测都基于GSH 依赖的转化反应:GSH 探针Luciferin-NT 在谷胱甘肽S 转移酶的催化作用下,转变为萤光素,并与萤火虫萤光素酶反应偶联。萤光素酶反应产生的光信号依赖于上述转化反应形成的萤光素的含量,而萤光素的含量又依赖于存在的GSH 的含量;这就使得发光信号与GSH 的含量成正比。总谷胱甘肽与GSSG 的检测反应平行进行。在一个反应中,检测试剂用于测定谷胱甘肽的总含量,通过用还原试剂将细胞裂解液中的所有谷胱甘肽(GSH+GSSG)都转变为还原型谷胱甘肽GSH 来实现。在另一个反应中,检测试剂只用于测定氧化型谷胱甘肽GSSG 的含量。在该检测中,先用一种试剂阻断所有的GSH,保持GSSG 不变,之后将GSSG 还原为GSH,并用发光反应来定量。由于这些检测都是直接在培养细胞中进行,从而使得GSH 或GSSG的损失最小,减少了可变性。

 

特点

 

•  与生理相关的 GSH/GSSG 比率:总谷胱甘肽与 GSSG 真实水平的检测都是直接在细胞培养板中进行的,使得 GSH 或 GSSG 的损失最小;而传统的检测方法都需要样品的预先准备以及非直接的 GSSG 计算。

•  性能更强劲:生物发光技术与简单的操作方案使得样品的处理步骤最少,减少了可变性。

•  操作简单:将检测试剂直接加入到多孔板培养的细胞中,采用均质的“加入 - 混合 - 读数”检测模式,无需费时的样品去蛋白和离心步骤(传统检测方法所必需的)。

•  灵敏度更高:与传统的方法相比,该检测方法的灵敏度更高,检测所需的细胞数目更少。

•  更快得到结果:均质的“加入 - 混合 - 读数”方法使得实验操作时间最少,发光检测技术也使得孵育时间最少。

•  适于自动化:该检测方法产生稳定的辉光型信号,半衰期大于 2 个小时,适于在 96 孔和 384 孔板上进行自动化操作。

•  无荧光信号干扰: 使用发光法读数,减少了检测试剂与待测样品间的荧光干扰;而这种干扰在荧光检测法中时有发生,从而使得分析过程变得复杂,容易产生误导的或不相干的数据。

 

应用  

•  检测细胞内的总谷胱甘肽和 GSSG 水平,作为细胞活力的指标。

•  检测细胞内的 GSH/GSSG 比率,作为氧化应激的指标。

•  筛选调节细胞内总谷胱甘肽水平的药物和新化合物。

 


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