pLB零背景快速克隆试剂盒(不含MCS)

• 产品编号：TG-VT206-01      品牌：TIANGEN天根生化       原厂货号：VT206-01
• 产品分类：
• 应用分类：

描述：

pLB零背景快速克隆试剂盒（不含MCS）是一种阳性选择克隆系统，可以高效克隆各种PCR产物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。阳性选择载体和插入片段连接仅需5 min即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）扩增的平末端PCR产物可直接连入克隆载体。由无校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物扩增的PCR产物在连接前需用试剂盒提供的热稳定DNA平端化酶进行末端平端化（7 min）即可。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。

试剂盒提供一个新颖的即用型阳性选择克隆载体pLB-simple Vector。该载体含有致死基因，克隆位点处插入外源片段会引起基因失活，因此只有转化了重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落。而自身环化的pLB-simple Vector表达致死毒性蛋白（无外源片段插入），转化后杀死大肠杆菌细胞。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。

产品特点

高效快速：零背景无需蓝白斑筛选，5 min快速连接

灵敏广泛：适合低浓度片段和长片段连接，适合平/粘末端连接

无多克隆位点：方便客户自行引入酶切位点进行亚克隆

不同片段使用量

1.载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:10，对于1kb以下的片段建议使用1:3的比例，1kb以上的片段建议使用1:7的比例。

2.请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：

连接体系中35 ng的载体，不同大小的PCR产物最佳加入量举例如下：

原厂资料：

pLB零背景快速克隆试剂盒（不含MCS）是一种阳性选择克隆系统，可以高效克隆各种PCR产物和任何具有平末端或粘性末端的DNA片段。该试剂盒对磷酸化或非磷酸化的DNA片段都有效。阳性选择载体和插入片段连接仅需5 min即可获得超过95%的阳性重组克隆。由具有校正活性的聚合酶（如：Pfu Polymerase）扩增的平末端PCR产物可直接连入克隆载体。由无校正活性的聚合酶（如：Taq Polymerase）或聚合酶混合物扩增的PCR产物在连接前需用试剂盒提供的热稳定DNA平端化酶进行末端平端化（7 min）即可。连接产物可直接转化常用的大肠杆菌菌株。

试剂盒提供一个新颖的即用型阳性选择克隆载体pLB-simple Vector。该载体含有致死基因，克隆位点处插入外源片段会引起基因失活，因此只有转化了重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落。而自身环化的pLB-simple Vector表达致死毒性蛋白（无外源片段插入），转化后杀死大肠杆菌细胞。这种阳性筛选策略无需蓝白斑筛选，极大地加速了克隆筛选进程。

产品特点

高效快速：零背景无需蓝白斑筛选，5 min快速连接

灵敏广泛：适合低浓度片段和长片段连接，适合平/粘末端连接

无多克隆位点：方便客户自行引入酶切位点进行亚克隆

不同片段使用量

1.载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:10，对于1kb以下的片段建议使用1:3的比例，1kb以上的片段建议使用1:7的比例。

2.请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：

连接体系中35 ng的载体，不同大小的PCR产物最佳加入量举例如下：

注意事项：

1. 转化过程中使用对照片段做对照是非常必要的，在实验出现问题时可以确定原因。

2. 建议留下部分连接产物，在出现问题后能迅速的补救，减少不必要的重复实验。

3. 涂布用量可根据具体实验作相应调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000 rpm，2 min）后吸除部分培养液，留下适量的培养基悬浮菌体后将其涂布于一个平板中（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板）。