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描述:
Flp-In™ 细胞系设计用于快速产生通过 Flp-In™ 表达载体表达目的蛋白质的稳定细胞系。 这些细胞在具有转录活性的基因坐处含有单个稳定整合的 FRT 位点。 Flp-In™ 表达载体的靶向整合确保了目的基因的高水平表达。 有六种可用于产生同基因稳定细胞系的 Flp-In™ 细胞系以及用于产生四环素调节的稳定细胞系的 Flp-In™ T-REx™ 细胞系。 通过用 pFRT/lacZeo 转染母细胞系并选择稳定的 Zeocin™-抗性克隆产生 Flp-In™-CV-1、Flp-In™-293、Flp-In™-BHK、Flp-In™-Jurkat 和 Flp-In™-3T3 细胞系。 通过用 pFRT/lacZeo2 转染 CHO 细胞并选择 Zeocin™-抗性克隆产生 Flp-In™-CHO 细胞系。 Flp-In™ T-REx™-293 细胞系含有稳定整合的 pFRT/lacZeo 和 pcDNA™6/TR(来自 T-REx™ 系统)。 用 Flp-In™ 表达载体和 Flp 重组酶载体 pOG44 共转染 Flp-In™ 细胞系可以使表达载体靶向整合到每个细胞中的相同基因座,确保了均一的基因表达水平。 选择 Flp-In™ 载体/细胞系组合 Flp-In™-CV-1、Flp-In™-293、Flp-In™-CHO 和 Flp-In™-Jurkat 细胞系(图 1)与表达具有 CMV 启动子的基因的 Flp-In™ 载体(pcDNA™5/FRT、pcDNA5/FRT/V5-His-TOPO® 和 pSecTag/FRT/V5-His-TOPO®)组合效果很好。 Flp-In™-BHK 和 Flp-In™-3T3 细胞倾向于下调 CMV 启动子。 因此,对于这些细胞系,推荐含有 EF-1α 启动子的 Flp-In™ 载体(pEF5/FRT/V5-DEST™ 和 pEF5/FRT/V5-D-TOPO®)。
原厂资料:
注意事项:
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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参考文献
本产品可用于的实验
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