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描述:
性能
使用QIAGEN Large-Construct Kit纯化DNA,无基因组DNA的污染(参见Efficient removal of genomic DNA)。基因组DNA的去除确保准确可靠的进行DNA定量,使一些敏感实验可在明确的和可重复的条件下进行。
原理
QIAGEN Large-Construct Kit使用经优化的重力流操作,获得的DNA的纯度显著高于其他常规方法获得的DNA的纯度。独特的ATP-dependent外切酶消化步骤,确保特异性去除基因组DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂专为核酸纯化设计。其出色的核酸分离特性可纯化得到高纯度DNA,相当于经过两次氯化铯梯度离心得到的纯度。预装的QIAGEN-tips(参见Anion-exchange tips)运用重力沉降原理,减少了质粒制备过程所需的手工操作时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用苯酚、氯仿、溴乙锭和氯化铯等有毒物质,最大程度减小了对使用者及环境的危害。
操作流程
使用碱裂解法裂解多达500 ml的培养液后(参见QIAGEN Plasmid Kit procedures),使用试剂盒中的ATP-dependent外切酶进行消化,确保特异性去除基因组DNA及缺损的高分子量DNA。之后将样本上样至阴离子交换柱,在适当的低盐浓度和pH值条件下,质粒DNA与树脂特异性结合。用中等盐浓度的缓冲液洗涤,去除RNA、蛋白质、代谢物和其他小分子的杂质。用高盐缓冲液洗脱已去除基因组DNA的纯化质粒DNA。加入异丙醇使DNA浓缩和脱盐,之后离心收集。
应用
QIAGEN Large-Construct Kit纯化获得的DNA适用于各种下游应用,包括:
亚克隆和鸟枪法制备DNA文库
对高分子量DNA直接进行测序
转染
Feature
Specifications
Applications
Subcloning, transfection, sequencing etc.
Culture volume/starting material
<500 ml culture volume
Plasmid type
BAC, PAC, P1, cosmid DNA
Processing
Manual (centrifugation)
Samples per run; throughput
1 sample per run
Technology
Anion-exchange technology
Time per run or prep per run
280 min
Yield
<150 ug
原厂资料:
相关图片
说明书
参考文献
本产品可用于的实验
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