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PNGase F (Glycerol-free)

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描述：

特性

■ 去除糖蛋白的 N-连聚糖

■ 无甘油糖苷酶产品适用于 HPLC

概述

肽 N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一种酰氨酶，可以在 N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割（1）。PNGase F 以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 方法中取得最佳效果。

来源

从脑膜败血性黄杆菌（Flavobacterium meningosepticum）中提取纯化。

反应条件

将 1X 糖蛋白于糖蛋白变性缓冲液 (含 0.5% SDS，400 mM DTT) 中 100℃ 煮沸 10 分钟使其变性，再在加入 1% NP-40 的 1X G7 反应缓冲液中 37℃ 温育进行酶切反应。

随酶提供的试剂

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X G7 缓冲液
10% NP-40

比活性

~1,800,000 units/mg。

分子量

36 kDa。

质量保证

无外切糖苷酶污染，无内切糖苷酶 F1、F2 和 F3 活性。无污染的蛋白水解活性。

单位定义

1 单位指在 10 μl 的反应体系中，37 ℃ 条件下1 小时从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。

浓度

500,000 units/ml。

热失活

70 ℃ 10 分钟。

注意事项：

已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入 NP-40。要使天然糖蛋白去糖基化，或许需要增加酶量和延长温育时间。