T4 RNA Ligase 2, truncated K227Q

• 产品编号：M0351L      品牌：New England Biolabs       原厂货号：M0351L
• 产品分类：克隆 > 限制性内切酶和连接酶 > 连接酶
• 应用分类：

描述：

特性

■  将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3' 末端
■  将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 克隆文库构建
■  将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于特异链 cDNA 文库构建

概述

T4 RNA 连接酶 2，截短型 K227Q (T4 Rnl2tr K227Q) 可特异地将 5' 末端预腺苷化的 DNA 或RNA 连接到RNA 3' OH 末端。该酶连接时不需要ATP，但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q 是 T4RNA 连接酶 2 截短型 (NEB #M0242) 的点突变体，K227 的突变减少了酶、赖氨酰及腺苷复合物的形成，也降低了非特异性的连接产物 (多连体和环状体) ，后者可能是通过降低该酶从接头向 RNA 5'磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。该酶在连接反应中，无需 ATP，利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖氨酰腺苷化活性能将连接背景降为最低。此酶已被用于 microRNA 克隆中接头的优化连接。

来源

T4 Rnl2tr K227Q 与 MBP 融合表达自大肠杆菌质粒，质粒编码有 T4 RNA 连接酶 2 全长基因的前 249 个氨基酸，在 227 位点处，赖氨酸突变为谷氨酰胺。

反应条件

1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。

随酶提供的试剂

10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液
50% PEG 8000

质保声明

无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。

单位定义

200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时能将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer

DNA 末端[通用 miRNA 克隆接头 (NEB#S1315) ]所需的酶量。5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´
5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´

浓度

200,000 units/ml。

热失活

65℃ 加热 20 分钟

原厂资料：