■ 重组酶
■ 除去杂交到 p ol y (d T ) 上的 mRNApoly(A)
■ 在 cDNA 第二链合成时除去 mRNA
概述
核糖核酸酶 HII (RNase HII) 为核糖核酸内切酶,适用于在双链 DNA 内部切刻核糖核酸的 5' 末端,产生 5' 磷酸和 3' 羟基末端。RNase HII 还可以在冈崎片段的 RNA 部分进行多处切割。
来源
重组 E. coli 菌株,该菌株包含 E. coli 的 RNase HII 基因 (rnhB) 和编码麦芽糖结合蛋白基因 (MBP) 的融合基因。亲和层析后,用 Xa 因子将 RNase HII 从融合蛋白中切割分离,然后再进行纯化去除 MBP 和 Xa 因子。从 MBP 中切割下来的 RNase HII 在其 N 端多出四个氨基酸 (Ile -Ser-Glu-Phe) 。
反应条件
1X ThermoPol 反应缓冲液 [10 mM KCl,20 mM Tris-HCl,10 mM (NH4)2SO4,2 mM MgSO4,0.1%Triton X-100 (pH 8.8 @ 25℃) ]。37℃ 温育。