DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment, high conc.

• 产品编号：M0210M      品牌：New England Biolabs       原厂货号：M0210M
• 产品分类：克隆 > 聚合酶 > DNA聚合酶
• 应用分类：

描述：

■  用随机引物制备探针
■  补平 5' 突出端，形成平末端
■  切除 3' 突出端，形成平末端
■  合成 cDNA 第二条链
■  诱变反应中第二条链的合成
■  双脱氧法 DNA 序列测定 (Sanger 法)

概述：DNA 聚合酶 I 大片段 (Klenow 片段) 是 E. coli DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物，具有 DNA 聚合酶活性和 3' →5' 核酸外切酶活性，但缺失了 5' →3' 核酸外切酶活性。Klenow 既保留了全酶的高保真性，又不会降解 DNA 5' 末端 。

来源：来源于重组融合的 E. coli polA 基因，应用基因重组技术，将麦芽糖结合蛋白 (MBP) 基因取代 E. coli 的 polA 的 5' →3' 外切酶结构域基因，表达的融合蛋白经切割并分离纯化去除 MBP，从而获得 Klenow 片段，其氨基和羧基末端与常规方法制备的 Klenow 片段相同。

反应条件：1X NEBuffer 2[10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]。加入 dNTPs (不随酶提供) 。
当添加 dNTPs 后，Klenow 片段在所有的 NEB 限制性内切酶反应缓冲液和 T4 DNA 连接酶反应缓冲液中都有活性。

单位定义：1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度：50,000 units/ml。

热失活：75°C 20 分钟。

原厂资料：

■  用随机引物制备探针
■  补平 5' 突出端，形成平末端
■  切除 3' 突出端，形成平末端
■  合成 cDNA 第二条链
■  诱变反应中第二条链的合成
■  双脱氧法 DNA 序列测定 (Sanger 法)

概述：DNA 聚合酶 I 大片段 (Klenow 片段) 是 E. coli DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物，具有 DNA 聚合酶活性和 3' →5' 核酸外切酶活性，但缺失了 5' →3' 核酸外切酶活性。Klenow 既保留了全酶的高保真性，又不会降解 DNA 5' 末端 。

来源：来源于重组融合的 E. coli polA 基因，应用基因重组技术，将麦芽糖结合蛋白 (MBP) 基因取代 E. coli 的 polA 的 5' →3' 外切酶结构域基因，表达的融合蛋白经切割并分离纯化去除 MBP，从而获得 Klenow 片段，其氨基和羧基末端与常规方法制备的 Klenow 片段相同。

反应条件：1X NEBuffer 2[10 mM Tris-HCl，50 mM NaCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT (pH 7.9 @ 25℃) ]。加入 dNTPs (不随酶提供) 。
当添加 dNTPs 后，Klenow 片段在所有的 NEB 限制性内切酶反应缓冲液和 T4 DNA 连接酶反应缓冲液中都有活性。

单位定义：1 单位指 37℃ 条件下，30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

浓度：50,000 units/ml。

热失活：75°C 20 分钟。

注意事项：

由于该酶具有 3' →5' 核酸外切酶活性，升高反应温度、加入过量的酶、未加入 dNTP 或反应时间过长均会导致 DNA 末端碱基被切除形成凹陷。