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T4 DNA Ligase, high conc.

 
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描述:

特性:

■  高反应效率
■  粘性末端和平齐末端均可连接
■  限制性酶切片段的克隆
■  将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端

■  室温或 16℃ 均有活性

 

概述;该酶催化契合的双链DNA或RNA的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端 DNA 之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻(1) 。

 

来源:纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8(2) 。

 

反应条件:1 X  T4  DNA  连接酶缓冲液 [ 50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25 ℃),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP]。推荐 DNA 5' 末端浓度为 0.1-1.0 μM。16℃ 温育。

 

单位定义:1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中,16 ℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的经 HindIII 消化的 λDNA 片段 [5' 端浓度为 0.12 μM (300 μg/ml)] 连接所需的酶量。

 

浓度; 2,000,000 units/ml。

 

热失活;65°C 10分钟。

 

室温连接反应:为方便起见,连接反应可以在室温 (20-25 ℃) 条件下进行。粘性末端连接:在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA  连接酶,反应 10  分钟。平齐末端连接:在 20 μl  反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶反应 2 小时,或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA  连接酶反应 10 分钟。

 

 


注意事项:

与大肠杆菌 DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应保存于 -20 ℃,50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001)。如稀释后马上使用,则可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP,连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液

(NEBuffer-s)或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。


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参考文献

本产品可用于的实验

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