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描述:
BLOCK-iT0222 慢病毒 RNAi 表达系统中提供的 pLenti6/BLOCK-iT0222-DEST 表达载体可用于在体内高效导入和稳定表达来自慢病毒载体的短发夹 RNA (shRNA)。 新型克隆方法将约 50 bp DNA 寡核苷酸克隆到 BLOCK-iT™ U6 入门载体中紧随 U6 pol III 启动子之后的位置。 该寡核苷酸设计用于 表达形成茎环结构,包含目的基因正义区和反义区的 RNA。 然后将该 shRNA 重组到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体中。 制备和转导病毒后,U6 启动子驱动的 shRNA 被稳定整合成 RNAi 表达盒。 生成的 shRNA 可避开宿主防御机制,将有效产生 RNAi 基因抑制反应(图 1)。 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体(图 2)提供: • attR 位点,用于与侧翼序列为 attL 并含有 RNAi 表达盒的 U6 Gateway® 入门载体进行高效重组。 • 高效包装腺病毒并将其导入目的 shRNA 所需的全部组分 • 灭瘟素筛选标记,用于快速高效地筛选表达 shRNA 的稳定细胞系。通过 BLOCK-iT0222 慢病毒 RNAi 表达系统,可在分裂和非分裂哺乳动物细胞类型以及动物模型中实现基因阻断的长期分析。 BLOCK-iT™ RNAi U6 入门载体试剂盒 (BLOCK-iT™ RNAi U6 Entry Vector Kit) 可简化瞬时实验中测试所用 shRNA 靶序列的克隆过程。 的 Gateway® LR 重组反应,选定的 RNAi 表达盒可从 BLOCK-iT™ RNAi U6 入门载体快速高效地重组到 pLenti6/BLOCK-iT™-DEST 载体中(图 3)。
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