POL II MIR RNAI GFP VECTOR 20 RXNS

• 产品编号：K493600      品牌：invitrogen       原厂货号：K493600
• 产品分类：DNA和RNA纯化 > RNA干扰 > RNAi载体（shRNA)
• 应用分类：暂定分类 > Gateway® 克隆 > 目的载体

描述：

带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP) 将传统 RNAi 载体的优点（表达稳定并能够使用病毒导入）以及组织特异性表达和同一转录本多靶点抑制的功能集于一身。 带有 EmGFP 的 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP) 含有的 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体设计用于表达人工 miRNA，该 miRNA 经工程化改造，与目的基因序列有 100% 的同源性并能引起靶标分子的切割。 该载体包括内源性 miRNA 的侧翼序列和环序列，内源性 miRNA 可指导从较长的 Pol II 转录本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 Invitrogen 一流的 BLOCK-iT™ RNAi Designer，超过 70% 的重组体能产生超过 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表达可实现：
o 在 CMV 即刻早期启动子作用下高效表达，可通过 MultiSite Gateway® 重组选择组织特异性启动子和其它受调控的启动子
o 在 pcDNA™6.2-GW/EmGFP-miR 载体中同-顺反子表达 Emerald GFP (EmGFP) 报告基因，使 EmGFP 的表达与目的 miRNA 抑制活性之间具有极强的相关性
o 与用于基因表达的多种 Invitrogen Gateway® 目的 (DEST) 载体兼容；包括用于稳定转导分裂细胞、非分裂细胞和原代细胞类型的慢病毒载体，用于染色体单位点整合的 Flp-In™ 系统，以及替代报告基因融合构建体
o 可在同一转录本表达的工程化 miRNA 多于一种，从而可同时抑制多个基因并产生合成表型
工作原理
为了能高水平表达 miR RNAi 序列，pcDNA™6.2-GW/miR 载体含有 CMV 启动子（图 1）。 只需在免费的在线 BLOCK-iT™ RNAi Designer 中输入 RefSeq 注册号或核苷酸序列，该软件就会设计与目的基因具有 100% 同源性的优化 miRNA。 采用快速连接实验方案克隆 miRNA 并进行转染，可立即表达 miRNA。 所表达的 miRNA 在核内经内源细胞机制（包括 Drosha 酶）加工后，转运至细胞质，由 Dicer 酶进一步加工（图 2）。 然后，完成加工的 miRNA 结合到 RISC，在此处其功能类似于 siRNA，使 mRNA 靶标被切割。
miRNA 表达盒（含有 EmGFP）、miR 侧翼区及与目的基因同源的 miRNA 可轻松转移到各种 DEST 载体中，因而可以通过多种方式进行表达。 具体机制是：通过 Gateway® 重组反应将 miRNA 表达盒转移到 pDONR™ 载体（BP 反应），再转移到所选的 DEST 载体（LR 反应）。

原厂资料：

注意事项：