POL II MIR RNAI VECTOR 20 RXNS

• 产品编号：K493500      品牌：invitrogen       原厂货号：K493500
• 产品分类：DNA和RNA纯化 > RNA干扰 > RNAi载体（shRNA)
• 应用分类：

描述：

BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit) 将传统 RNAi 载体的优点（表达稳定并能够使用病毒导入）以及组织特异性表达和同一转录本多靶点抑制的功能集于一身。 BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi 表达载体试剂盒 (BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit) 含有的 pcDNA™6.2-GW/miR 载体设计用于表达人工 miRNA，这些经过工程设计的 miRNA 与靶序列有 100% 的同源性，可以引起靶标的切割。 该载体包括内源性 miRNA 的侧翼序列和环序列，内源性 miRNA 可指导从较长的 Pol II 转录本 (pre-miRNA) 上切除工程化的 miRNA。 使用 Invitrogen 一流的 BLOCK-iT™ RNAi Designer，超过 70% 的重组体能产生超过 70% 的抑制效率。 工程化 miRNA 的 Pol II 表达可实现：
o 在 CMV 即刻早期启动子作用下高效表达，可通过 MultiSite Gateway® 重组技术选用组织特异性启动子和其它受调控的启动子
o 与用于基因表达的多种 Invitrogen Gateway® 目的 (DEST) 载体兼容；包括用于稳定转导分裂细胞、非分裂细胞和原代细胞类型的慢病毒载体，用于染色体单位点整合的 Flp-In™ 系统，以及替代报告基因融合构建体
o 同一转录本可表达的工程化 miRNA 多于一种，因此可同时抑制多个基因并产生合成表型
工作原理
为了实现 miR RNAi 序列的高水平表达，pcDNA™6.2-GW/miR 载体含有 CMV 启动子（图 1）。 只需在免费的在线 BLOCK-iT™ RNAi Designer 中输入 RefSeq 注册号或核苷酸序列，该软件就会设计与目的基因具有 100% 同源性的优化 miRNA。 采用快速连接实验方案克隆 miRNA 并进行转染，可立即表达 miRNA。 所表达的 miRNA 在核内经内源细胞机制（包括 Drosha 酶）加工后，转运至细胞质，由 Dicer 酶进一步加工（图 2）。 然后，完成加工的 miRNA 结合到 RISC，在此处其功能类似于 siRNA，使 mRNA 靶标被切割。
miRNA 表达盒、miR 侧翼区及与目的基因同源的 miRNA 可轻松转移到多种 DEST 载体中，因此能以多种方式进行表达。 具体机制是：通过 Gateway® 重组反应将 miRNA 表达盒转移到 pDONR™ 载体（BP 反应），再转移到所选的 DEST 载体（LR 反应）。

原厂资料：

注意事项：