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PENTR/SD/D-TOPO CLONING KIT 20 REACTIONS

 
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运费与支付说明：

1.含干冰类产品有运费；

2. 必须现金付款或有信用额度的会员才可以直接发货，否则需要等待现金付款信息。

其它组分：

pENTR™ TOPO® vector,TOPO®-adapted【子货号：450219，包装：20 μl，，运保温度：-20°C】
dNTP Mix【子货号：w，包装：10 μl，，运保温度：-20°C】
Salt Solution【子货号：w，包装：50 μl，，运保温度：-20°C】
Water【子货号：w，包装：1 ml，，运保温度：-20°C】
M13 Forward (-20)Sequencing Primer【子货号：w，包装：20 μl，，运保温度：-20°C】
M13 Reverse Sequencing Primer【子货号：w，包装：20 μl，，运保温度：-20°C】
Control PCR Primers【子货号：w，包装：10 μl，，运保温度：-20°C】
Control PCR Template【子货号：w，包装：10 μl，，运保温度：-20°C】
S.O.C. Medium【子货号：w，包装：6 ml，，运保温度：room temperature or +4°C】
TOP10 or Mach1™-T1Rcells 【子货号：C404003，包装：21 x 50 μl，，运保温度：-80°C】
pUC19 Control DNA【子货号：w，包装：50 μl，，运保温度：-80°C】


描述：

Invitrogen 的pENTR™⁄SD⁄D-TOPO®克隆试剂盒采用高效的5分钟克隆策略("TOPO®克隆") ，能够将平端PCR产物能以定向插入Gateway® 系统或者多位点Gateway® 系统，平端PCR克隆产物的定向插入pENTR™⁄SD⁄D-TOPO® 载体的效率超过90%，而且包含Shine-Dalgarno上游序列，用于原核系统中的表达。这一试剂盒包括了筛选PCR目标扩增基因所需的一切试剂。

 

  • Gateway® 系统就绪 — 克隆基因在多个载体系统中快速穿梭
  • 快速简便 — 从PCR到Gateway®，克隆插入仅需3步，最少仅需5分钟
  • 高效 — 定向性插入的正确克隆超过90%
  • 成熟可靠 — 十余年的可靠表现

pENTR™⁄SD⁄D-TOPO® 克隆试剂盒综述

载体

 pENTR™⁄SD⁄D-TOPO® 载体 确保克隆能定向性插入Gateway ® 系统并经过优化适用于原核表达

克隆方法

 定向 TOPO®克隆 在拓扑异构酶作用下，在5分钟内将高保真聚合酶扩增的PCR平端产物定向连接到载体中

感受态细胞

 两种选择 选择高效的试剂盒，或者生长迅速的感受态细胞

简便地插入Gateway® 系统
插入Gateway®系统，只需扩增您的目标基因，之后将PCR产物直接加入到试剂盒中提供的具有拓扑异构酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®载体中，孵育5分钟，然后转化试剂盒中提供的感受态 大肠杆菌 细胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地与Gateway®目标载体进行重组。

优化的pENTR™⁄D-TOPO® 载体
pENTR™⁄D-TOPO®载体(图1)包括M13和T7引物测序位点，以及PCR产物插入位点侧翼的attL重

组位点。这使得克隆的测序验证以及与您选择的含attR Gateway®目标载体进行重组变得简单。卡那霉素抗性基因以及pUC启动子可用于筛选和在大肠杆菌中进行高拷贝扩增。

简化的定向克隆
使用TOPO®定向克隆技术，您不再需要PCR纯化，载体制备，或者其他耗时的DNA操作步骤。只需要直接将您的PCR反应产物加入到提供的含拓扑异构酶的载体中，孵育5分钟，然后进行转化，就可获得90%以上正确插入的克隆。载体中的4个碱基，与您在PCR反应中使用的正向引物中预先设计的4个碱基进行配对，保证了拓扑异构酶催化的连接反应的定向性(图2)。

Gateway®重组克隆技术的优势
Gateway®重组克隆技术克服了限制性酶催化克隆的局限性，使您能在短短1个小时内将产物插入任何表达系统中，效率高达99%，而且Gateway® 重组反应……


注意事项：

Store Competent E. coli at -80°C. Store all other components at -20°C.


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说明书

参考文献

本产品可用于的实验

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