PENTR/D-TOPO CLONING KIT 20 REACTIONS

• 产品编号：K240020      品牌：invitrogen       原厂货号：K240020
• 产品分类：克隆 > 克隆载体和克隆试剂盒 > 不依赖DNA连接酶的克隆试剂盒 > 其它克隆载体 > Gateway入门载体-pENTR
• 应用分类：暂定分类 > TOPO® TA Cloning > TOPO® Cloning Kit by Application
  　　　　　暂定分类 > Gateway® 克隆 > 入门载体与试剂盒
  　　　　　暂定分类 > Gateway® 克隆 > 入门克隆

其它组分：

描述：

Invitrogen 的pENTR™⁄D-TOPO® 克隆试剂盒采用高效的5分钟克隆策略("TOPO® Cloning") ，能够将平端PCR产物能以定向插入Gateway® 系统或多位点Gateway® 系统，平端PCR克隆产物的定向插入率超过90%，无需连接酶，PCR后处理或者限制性酶。这一试剂盒包括了筛选PCR目标扩增基因所需的一切试剂。

 

• Gateway® 系统 Ready — 可在多个载体系统中快速构建克隆基因
• 快速简便 — 从PCR到Gateway®，克隆插入仅需3步，最少仅需5分钟
• 高效 — 定向插入的正确克隆超过90%
• 成熟可靠 — 十余年的优异表现

简便地插入Gateway® 系统
插入Gateway®系统，只需扩增您的目标基因，之后将PCR产物直接加入到试剂盒中提供的具有拓扑异构酶活性的pENTR™⁄D-TOPO®载体中，孵育5分钟，然后转化试剂盒中提供的感受态 大肠杆菌 细胞。得到的含有Gateway®的插入克隆就可以高效地与Gateway®目标载体进行重组。

优化的pENTR™⁄D-TOPO® 载体
pENTR™⁄D-TOPO®载体(图1)包括M13和T7引物测序位点，以及PCR产物插入位点侧翼的attL重组位点。这使得克隆的测序验证以及与您选择的含attR Gateway®目标载体进行重组变得简单。卡那霉素抗性基因查看更多以及pUC启动子可用于筛选和在大肠杆菌中进行高拷贝扩增。

简化的定向克隆
使用TOPO®定向克隆技术，您不再需要PCR纯化，载体制备，或者其他耗时的DNA操作步骤。只需要直接将您的PCR反应产物加入到提供的含拓扑异构酶的载体中，孵育5分钟，然后进行转化，就可获得90%以上正确插入的克隆。载体中的4个碱基，与您在PCR反应中使用的正向引物中预先设计的4个碱基进行配对，保证了拓扑异构酶催化的连接反应的定向性(图2)。

Gateway®重组克隆技术的优势
Gateway®重组克隆技术克服了限制性酶催化克隆的局限性，使您能在短短1个小时内将产物插入任何表达系统中，效率高达99%，而且Gateway® 重组反应是可逆的。这使得能在不同载体中转移同一序列的DNA，无需使用限制性酶，连接酶，亚克隆步骤，筛选大量克隆，或者重新测序，帮助您节约时间和金钱，降低工作量。

领先的克隆技术
当其应用于克隆时，TOPO®技术和Gateway®重组克隆技术就成为大多数科研人员的可靠助手。

原厂资料：

注意事项：

pENTR™⁄D-TOPO® Cloning Kit contains pENTR⁄D-TOPO® vector, dNTPs, salt solution, sterile water, universal M13 sequencing primers, OneShot® TOP10 Chemically E. coli, S.O.C. Medium, and a pUC19 control plasmid. Store Competent E. coli at -80°C. Store all other components at -20°C.