#MULTI-COPY PICHIA EXP KIT 1 KIT

产品编号：K175001 品牌：invitrogen 原厂货号：K175001
产品分类：蛋白质表达与纯化 > 蛋白质表达系统 > 酵母表达系统
应用分类：蛋白质研究 > 蛋白质表达 > 酵母表达 > 酵母表达试剂盒

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描述：

多拷贝毕赤酵母表达试剂盒 (Multi-Copy Pichia Expression Kit) 包含 pPIC3.5K、pPIC9K 和 pAO815 载体，可用于生产和筛选具有一个以上拷贝目的基因的毕赤酵母。在多数情况下，增加拷贝数可提高表达水平。

pPIC9K 和 pPIC3.5K
pPIC9K 和 pPIC3.5K 载体带有卡那霉素抗性基因，该基因使毕赤酵母对 Geneticin® 试剂具有抗性。通过酵母对高浓度 Geneticin® 试剂的抗性来鉴别自然发生的多插入事件。 毕赤酵母转化株在组氨酸营养缺陷型培养基上选择，并针对 Geneticin® 试剂的抗性水平进行筛选。如果能在高浓度 Geneticin® 条件下生长，则表明多个拷贝的卡那霉素基因和目的基因整合到了基因组 (1)。 pPIC9K 载体可引导表达蛋白的分泌，而 pPIC3.5K 表达的蛋白保留在细胞内。

pAO815
pAO815 是毕赤酵母的表达载体，设计用来将基因的多个拷贝克隆到单个载体中。该载体在 5´ AOX1 基因的上游具有 Bgl II 位点，在 3´ AOX1 转录终止 (TT) 信号的下游具有唯一 BamH I 位点。要生成多个拷贝的目的基因，需要四个步骤：
1. 将基因克隆到载体的唯一 EcoR I 位点中。
2. 用 BamH I 和 Bgl II 对构建体进行双酶切，释放包含 AOX1 启动子、目的基因和 3´ AOX1 TT 的“表达盒”。
3. 进行体外连接，生成表达盒多联体。
4. 将多拷贝插回 pAO815 载体，再转化到毕赤酵母中。

注意事项：

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.