ApoLive-Glo? Multiplex Assay

产品编号：G6410 品牌：promega 原厂货号：G6410
产品分类：生化和细胞分析 > 细胞分析试剂盒 > 细胞凋亡试剂盒
应用分类：

包装：

10ml

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其它组分：

GF-AFC Substrate【子货号：G608A，包装：1 x 10μl，，运保温度： –20°C,避光】

Assay Buffer【子货号：G610A，包装：1 x 10ml，，运保温度： –20°C,避光】

Caspase-Glo® 3/7 Buffer【子货号：G810A，包装：1 x 10ml，，运保温度： –20°C,避光】

Caspase-Glo® 3/7 Substrate【子货号：G811A，包装：1 x 1 bottle，，运保温度： –20°C,避光】

描述：

说明

ApoLive-Glo™ Multiplex Assay （ ApoLive-Glo™ 多重检测试剂盒）在一个检测孔中，既能检测以活细胞数目为标志的细胞毒作用，又能检测以 caspase 活化作用为标志的细胞凋亡，从而确定细胞死亡的机理。该试剂盒的第一部分先检测标志着细胞活力的蛋白酶的活性。此蛋白酶仅在活细胞内表现出活性，可利用能够产生荧光的、可渗透进入细胞的多肽底物 ( 甘氨酰 - 苯丙氨酰 - 氨基荧光香豆素， GF-AFC) 进行检测。该底物进入胞膜完整的细胞后，被活细胞相关的蛋白酶剪切，生成荧光信号，信号强度与活细胞数目成正比。当细胞膜完整性缺失，细胞内容物渗漏到周围培养基时，活细胞相关的蛋白酶即失活。该试剂盒的第二部分使用 Caspase-Glo ® 检测技术来检查 caspase 的活化作用， caspase 的活化是细胞凋亡的关键生物标志物。 Caspase-Glo ® 检测试剂盒提供能发光的 caspase-3/7 底物，该底物含有四肽序列 DEVD ，试剂盒中的试剂针对 caspase 活性、萤光素酶活性和细胞裂解作了优化。以“加样 - 混合 - 检测”的模式加入 Caspase-Glo ® 3/7 试剂，可以使细胞裂解，接着 caspase 剪切底物，并由萤光素酶产生“辉光型”的发光信号。发光强度与存在的 caspase 的激活成正比。

特点

• 在同一个样品孔中同时检测活力和凋亡： 准确确定细胞死亡机制，耗时少、样品消耗少。

• 易于操作： 该检测只需简单地按“加样 - 混合 - 检测”的顺序进行。

• 以细胞活力为对照，对 caspase 数据进行归一化处理： caspase 活力与活细胞的比值对于确定 caspase 激活的程度和归一化细胞总数非常有用。

• 应用灵活，便于自动化： 每个检测组分的体积是可调的，以适合不同的通量要求，该试剂盒适于 96 和 384 孔板的自动化检测。

• 与其它试剂盒进行叠加检测： 检测的第一步不需要裂解细胞，这样可以叠加处于不同检测波长的荧光检测试剂盒。

原厂资料：

The ApoLive-Glo™ Multiplex Assay measures both the number of viable cells as a marker of cytotoxicity and caspase activation as a marker of apoptosis within a single assay well to determine the mechanism of cell death. The first part of the assay measures the activity of a protease marker of cell viability. The live-cell protease activity is restricted to intact viable cells and is measured using a fluorogenic, cell-permeant, peptide substrate (glycyl-phenylalanyl-amino fluorocoumarin; GF-AFC). The substrate enters intact cells, where it is cleaved by the live-cell protease activity to generate a fluorescent signal proportional to the number of living cells. This live-cell protease becomes inactive upon loss of cell membrane integrity and leakage into the surrounding culture medium. The second part of the assay uses the Caspase-Glo® Assay technology to detect caspase activation, a key biomarker of apoptosis. The Caspase-Glo® Assay provides a luminogenic caspase-3/7 substrate, which contains the tetrapeptide sequence DEVD, in a reagent optimized for caspase activity, luciferase activity and cell lysis. Adding the Caspase-Glo® 3/7 Reagent in an 'add-mix-measure' format results in cell lysis, followed by caspase cleavage of the substrate and generation of a 'glow-type' luminescent signal produced by luciferase. Luminescence is proportional to the amount of caspase activity present.

Features - Benefits

Measure Viability and Apoptosis in the Same Sample Well: Accurately determine the mechanism of cell death in less time with less sample.
Easy to Implement: The assay uses a simple sequential 'add-mix-measure' format.
Normalize Caspase Data with Viability Control: The ratio of caspase activity to viable cell is useful for determining the extent of caspase activation and for normalizing cell numbers.
Flexible and Easily Automated: The volumes of each assay component can be scaled to meet throughput needs, and the assay is amenable to automation in 96- and 384-well plates.
Reveal cell death even if the window of caspase activity is missed.
Multiplex with Other Assays: The nonlytic nature of the first step of the assay allows further multiplexing with spectrally distinct fluorescent assay chemistries.

Applications

Determine mechanism of cell death.
Profile compounds for cytotoxic risk.