ApoTox-Glo? Triplex Assay

说明

ApoTox-Glo™ Triplex Assay （ ApoTox-Glo™ 三重检测试剂盒）结合了三种检测试剂，能够轻松实现对同一孔细胞的活力、毒性和凋亡事件的评估。首先，细胞活力和细胞毒性的确定是通过同时检测两种不同的蛋白酶来实现的，实验时需要加入含有两种肽底物的试剂，该试剂本身不会导致细胞裂解。活细胞蛋白酶活性只能够从完整的活细胞中检测到，检测时所使用的是能够产生荧光的、可渗透进入细胞的多肽底物 (GF-AFC Substrate) 。该底物进入胞膜完整的细胞后，并被切割而生成荧光信号，信号强度与活细胞数目成正比。当细胞膜完整性缺失，细胞内容物渗漏到周围培养基时，活细胞相关的蛋白酶即失活。死细胞的检测是通过同时加入第二种底物 -- 不能穿透细胞膜的荧光肽底物 (bis-AAF-R110 Substrate) 而进行的，该底物可以检测死细胞蛋白酶的活性，因为死细胞失去了细胞膜完整性，将蛋白酶从细胞中释放出来。这就实现了细胞活力和细胞毒性的检测，两种结果是呈负相关的。活细胞相对于死细胞的比率与细胞总数无关，因此可用于归一化数据。接着加入第二种试剂，它含有针对 caspase-3/7 的发光底物 -- DEVD- 肽，以及 Ultra-Glo™ Recombinant Thermostable Luciferase （ Ultra-Glo™ 重组热稳定萤光素酶）。底物被 caspase-3/7 切割后释放出萤光素，它是萤光素酶的底物，能够在萤光素酶反应中产生光。使用发光检测仪可以检测产生的光，光的生成与与凋亡的关键指标 - caspase-3/7 的活性相关。

特点

•  在同一个样品孔中检测活力、细胞毒性和凋亡： 在同一个样品孔中确定细胞死亡的机理。

•  使用简单： 检测过程只需顺序进行“加样 - 混合 - 检测”。

•  自带对照参数，用于数据的归一化处理： 活细胞数 / 死细胞数的比率与细胞总数无关，可以用于归一化数据。数据归一化使得孔与孔、板与板和天与天之间的数据更具可比性。

•  灵活且便于自动化： 每一种检测组分的体积都可调整大小，以满足通量要求，也便于在 96 孔和 384 孔板上的自动化操作。

•  提高效率，节省预算： 通过在同一个孔中实现三种检测，减少了细胞培养成本和劳动力成本。