Phusion High-Fidelity PCR Kit

• 产品编号：F-553L      品牌：Finnzymes       原厂货号：F-553L
• 产品分类：PCR/RT-PCR/qRT-PCR > PCR > 高保真PCR
• 应用分类：

其它组分：

描述：

Thermo Scientific Phusion DNA 聚合酶为高保真PCR反应建立了新的标准。它们拥有其他任何DNA聚合酶都无法企及的性能。Phusion DNA聚合酶的错配率比Taq酶低50倍，比Pfu低6倍，是保真度最好的热稳定聚合酶，从而使之成为克隆或其他需要高保真性实验的首选。而该酶的独特结构使其即便在有PCR抑制剂存在的情况下，也能快速有效的得到目的产物。对研究者而言，这意味着方便和可信。此外，Phusion DNA聚合酶相较于其他酶而言，可用更少的酶得到更多的产物。

Phusion High-Fidelity PCR master mix 是便捷的2X 溶液，只需添加模板和引物即可进行实验，从而最大限度的减少了手动步骤，使用更为方便。Phusion高保真PCR试剂盒则包含了PCR所必需的所有试剂，包括对照模板和引物。

优点：

• 保真度高（在Phusion HF缓冲液中的错配率为4.4×10-7）
• 延伸时间短（15-30秒/kb）
• 功能强劲，只需最少的优化
• 更少的酶，更高的产量

应用：

• 高性能PCR
• 高保真PCR
• 克隆
• 测序（模板扩增）

优势：
1.错配率极低
Phusion DNA聚合酶的错配率极低，为高保真PCR建立了新标准。使用改良的lacI方法检测，Phusion DNA聚合酶的错配率比Taq DNA聚合酶低约50倍, 比Pfu DNA聚合酶低6倍（见下图）。




2.反应失败率最低

Phusion DNA聚合酶能够最大限度地容忍各种抑制剂和其它复杂的反应条件。这不但保证把反应的失败率降到最低，而且能够利用非纯化的材料直接进行PCR。在为人源样本和血液样本设计的Thermo Scientific直接PCR试剂盒中，Phusion DNA聚合酶是主要成分。



以多种未经DNA提纯的人源样本为模板进行直接PCR（图1）
不同的样品直接置于20μl PCR反应体系中。利用Phusion人源样本直接PCR试剂盒含有的对照引物成功扩增一段237bp的DNA。PCR反应使用的是Thermo Scientific UTW反应管和Piko热循环仪。



Phusion DNA 聚合酶集超高保真度、快速和强劲的性能于一体（图2）
从Thermus sp.基因组文库中随机挑选16个克隆进行扩增。结果显示了Phusion DNA聚合酶的强劲性能和快速。在用Phusion DNA聚合酶扩增时，94%的DNA片段被成功扩增，酶的用量更少，产量也更高。Pfu DNA聚合酶的成功率只有56%，Tap DNA聚合酶为62%，而且产量明显较少。


3.高保真快速PCR

与其他酶相比，Phusion DNA聚合酶在每次与DNA的结合反应中都能够掺入更多的核苷酸。其高处理能力大大缩短了延伸步骤的时间，进而加快了整个反应的进行。使用Phusion Flash High-Fidelity PCR Master Mix（Phusion 快速高保真PCR Master Mix）的反应时间最短，此试剂盒是专门针对快速PCR而研发的产品。由于其结构独特，Phusion DNA聚合酶的效率非常高。在任何PCR反应中，该酶的用量显著低于其他常见的聚合酶。Phusion DNA聚合酶的高速度和高效率使得它能在最短时间内获得大量产物。




用更少的酶 —— 获得更多的产物（图3）
使用3种不同的DNA聚合酶扩增一个长为3.8kb的人β球蛋白基因。使用Phusion DNA聚合酶可成功扩增出此3.8kb的基因组片段，退火和延长步骤仅需1分钟，明显快于其他两种聚合酶。一个单位的Phusion DNA聚合酶所获得的产物高于2.5或5个单位的Pfu DNA聚合酶的产量。



既快速又高产的Phusion Flash（图4）
在Piko热循环仪上，三种不同的聚合酶用不同的延伸时间（10-60s）扩增一段1.5kb的人类cathepsin K基因。只有Phusion Flash能够使用10秒和20秒这样极短的延伸时间完成实验。与其他测试的酶相比，它的特异性产物的产量也非常高。

 

1. 单酶： DNA聚合酶，缓冲液，DMSO和MgCl2
2. Master Mix：2X master mix
3. 试剂盒：所有必需的PCR反应成分包括对照模板和引物

原厂资料：

Thermo Scientific Phusion DNA Polymerases set a gold standard for PCR performance. They offer a combination of characteristics that no other enzyme can match. Featuring an error rate 50-fold lower than that of Taq, and 6-fold lower than that of Pfu, Phusion DNA Polymerase is the most accurate thermostable polymerase available. This feature makes Phusion DNA Polymerases superior choice for cloning and other applications requiring high fidelity. The unique structure of the enzyme enables short protocol times, abundant yields and robust performance, even in the presence of PCR inhibitors. For the researcher, that translates to ease-of-use and convenience. In addition, Phusion DNA Polymerases also produce higher yields with lower enzyme amounts than other DNA polymerases.

New Phusion Green format is a combination of Phusion DNA Polymerase and 5X Phusion Green Buffers. The buffers include a density reagent and two tracking dyes for direct loading of PCR products on a gel. The colored buffer does not interfere with excelent performance of Phusion DNA Polymerases and is compatible with downstream applications such as DNA sequencing, ligation and restriction digestion.

Phusion High-Fidelity PCR Master Mixes are convenient 2X mixes designed to minimize the number of pipetting steps. Only template and primers need to be added by the user. Phusion High-Fidelity PCR Kit contains all the necessary reagents for PCR including control template and primers.

Highlights
• Extreme fidelity (error rate 4.4 x 10-7 in Phusion HF Buffer)
• Polymerase speed allows short extension times (15 to 30 s/kb)
• Robust performance, minimal optimization needed
• Increased product yields with minimal enzyme amounts
• Direct loading on gel with Green Buffer

Applications
• High performance PCR
• High-fidelity PCR
• Cloning
• Sequencing (template generation)
• High throughput
• Difficult (GC-rich) templates
• Template generation for sequencing
• Long-range PCR
• Cloning
• Mutagenesis†
• Microarray

Includes

Phusion High-Fidelity PCR Kit (F-553):
• Phusion DNA Polymerase 2 U/μl
• 5X Phusion GC Buffer
• 5X Phusion HF Buffer
• dNTP mix (10 mM each)
• MgCl2 solution (50 mM)
• Control template (λ DNA)
• 1.3 kb primers (4 μM each)
• 10 kb primers (4 μM each)
• DNA size standard
• DMSO