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Phusion High-Fidelity PCR Kit

 
包装: 200 x 50ul
运保温度: -20 C
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运费与支付说明:

1.含干冰类产品有运费;

2. 必须现金付款或有信用额度的会员才可以直接发货,否则需要等待现金付款信息。

其它组分:

Phusion DNA Polymerase【包装:200 U】
5x Phusion HF buffer【包装:3 x 1.5 ml】
5x Phusion GC buffer【包装:1 x 1.5 ml】
dNTP mix【包装:400 µl】
MgCl2 solution【包装:1.5 ml】
Control lambda template【包装:40 µl】
1.3 kb primers【包装:50 µl】
10 kb primers【包装:50 µl】
DNA size standard【包装:400 µl】
DMSO【包装:0.5 ml】


描述:

Thermo Scientific Phusion DNA 聚合酶为高保真PCR反应建立了新的标准。它们拥有其他任何DNA聚合酶都无法企及的性能。Phusion DNA聚合酶的错配率比Taq酶低50倍,比Pfu低6倍,是保真度最好的热稳定聚合酶,从而使之成为克隆或其他需要高保真性实验的首选。而该酶的独特结构使其即便在有PCR抑制剂存在的情况下,也能快速有效的得到目的产物。对研究者而言,这意味着方便和可信。此外,Phusion DNA聚合酶相较于其他酶而言,可用更少的酶得到更多的产物。

Phusion High-Fidelity PCR master mix 是便捷的2X 溶液,只需添加模板和引物即可进行实验,从而最大限度的减少了手动步骤,使用更为方便。Phusion高保真PCR试剂盒则包含了PCR所必需的所有试剂,包括对照模板和引物。


优点:

• 保真度高(在Phusion HF缓冲液中的错配率为4.4×10-7)
• 延伸时间短(15-30秒/kb)
• 功能强劲,只需最少的优化
• 更少的酶,更高的产量


应用:

• 高性能PCR
• 高保真PCR
• 克隆
• 测序(模板扩增)


优势:
1.错配率极低
Phusion DNA聚合酶的错配率极低,为高保真PCR建立了新标准。使用改良的lacI方法检测,Phusion DNA聚合酶的错配率比Taq DNA聚合酶低约50倍, 比Pfu DNA聚合酶低6倍(见下图)。




2.反应失败率最低

Phusion DNA聚合酶能够最大限度地容忍各种抑制剂和其它复杂的反应条件。这不但保证把反应的失败率降到最低,而且能够利用非纯化的材料直接进行PCR。在为人源样本和血液样本设计的Thermo Scientific直接PCR试剂盒中,Phusion DNA聚合酶是主要成分。



以多种未经DNA提纯的人源样本为模板进行直接PCR(图1)
不同的样品直接置于20μl PCR反应体系中。利用Phusion人源样本直接PCR试剂盒含有的对照引物成功扩增一段237bp的DNA。PCR反应使用的是Thermo Scientific UTW反应管和Piko热循环仪。



Phusion DNA 聚合酶集超高保真度、快速和强劲的性能于一体(图2)
从Thermus sp.基因组文库中随机挑选16个克隆进行扩增。结果显示了Phusion DNA聚合酶的强劲性能和快速。在用Phusion DNA聚合酶扩增时,94%的DNA片段被成功扩增,酶的用量更少,产量也更高。Pfu DNA聚合酶的成功率只有56%,Tap DNA聚合酶为62%,而且产量明显较少。



3.高保真快速PCR

与其他酶相比,Phusion DNA聚合酶在每次与DNA的结合反应中都能够掺入更多的核苷酸。其高处理能力大大缩短了延伸步骤的时间,进而加快了整个反应的进行。使用Phusion Flash High-Fidelity PCR Master Mix(Phusion 快速高保真PCR Master Mix)的反应时间最短,此试剂盒是专门针对快速PCR而研发的产品。由于其结构独特,Phusion DNA聚合酶的效率非常高。在任何PCR反应中,该酶的用量显著低于其他常见的聚合酶。Phusion DNA聚合酶的高速度和高效率使得它能在最短时间内获得大量产物。




用更少的酶 —— 获得更多的产物(图3)
使用3种不同的DNA聚合酶扩增一个长为3.8kb的人β球蛋白基因。使用Phusion DNA聚合酶可成功扩增出此3.8kb的基因组片段,退火和延长步骤仅需1分钟,明显快于其他两种聚合酶。一个单位的Phusion DNA聚合酶所获得的产物高于2.5或5个单位的Pfu DNA聚合酶的产量。



既快速又高产的Phusion Flash(图4)
在Piko热循环仪上,三种不同的聚合酶用不同的延伸时间(10-60s)扩增一段1.5kb的人类cathepsin K基因。只有Phusion Flash能够使用10秒和20秒这样极短的延伸时间完成实验。与其他测试的酶相比,它的特异性产物的产量也非常高。


 

几种高性能酶对比:
 
对比项目 Phusion高保真DNA聚合酶 Phusion热启动II高保真DNA聚合酶 Phusion Flash高保真DNA聚合酶 Phire热启动IIDNA聚合酶
特点 平端或3’A端 平端 平端 平端 平端
目标片段长度 ≤ 20 kb ≤ 20 kb ≤ 20 kb ≤ 7.5 kb
  热启动
推荐延伸时间 15-30 s/kb 15-30 s/kb 15 s/kb 10-15 s/kb
  校正功能 一般
保真度 vs. Taq 52X 52X 25X 2X
形式 单酶 1 ---
  Master mix 2 --- ---
试剂盒 3 --- --- ---






















1. 单酶: DNA聚合酶,缓冲液,DMSO和MgCl2
2. Master Mix:2X master mix
3. 试剂盒:所有必需的PCR反应成分包括对照模板和引物


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说明书

参考文献

本产品可用于的实验

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