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NMUCI (TSP45I)

 
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描述:

限制酶反应条件

具有100%活性的推荐缓冲液 优化的反应温度 Enzyme activity in Thermo Scientific buffers, % Tango™ 缓冲液 : 双酶切
B (蓝色)
1X
G (绿色)
1X
O (橙色)
1X
R (红色)
1X
Tango™ (黄色)
1X / 2X
R 37°C 0-20 20-50 50-100 100 20-50 50-100 1X or 2X
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液R:
10 mM Tris-HCl (pH 8.5, 37°C), 10 mM MgCl2, 100 mM KCl, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。

保存缓冲液
NmuCI保存在:
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

连接和重新酶切
50倍NmuCI过量酶切后,超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。

双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

兼容性末端
Eco91I (G^GTCACC), MaeIII (^GTGAC)。

甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。

甲基化类型 序列 切割效果
CpG

5'...GTCAm5C G...3'
3'...CAGT Gm5C...5'

部分影响
CpG

5'...m5C GTCAm5C G...3'
3'... Gm5CAGT Gm5C...5'

部分影响

识别位点靠近PCR片段末端时的酶切效率

识别位点距离片段末端的碱基数
1 2 3 4 5
20-50 50-100

DNA 分子中识别位点的数量

Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
81 8 8 9 4 4
pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
4 4 4 4 5 7

 


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