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MBOII

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描述：

限制酶反应条件

具有100%活性的推荐缓冲液	优化的反应温度	Enzyme activity in Thermo Scientific buffers, %						Tango™ 缓冲液 : 双酶切
具有100%活性的推荐缓冲液	优化的反应温度	B (蓝色) 1X	G (绿色) 1X	O (橙色) 1X	R (红色) 1X	Tango™ (黄色) 1X / 2X		Tango™ 缓冲液 : 双酶切
B	37°C	100	50-100	20-50	0-20	50-100	20-50	1X or 2X

100%酶活性的反应条件

1X 缓冲液B：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl₂, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。

保存缓冲液

MboII保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 25°C), 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

连接和重新酶切

5倍MboII过量酶切后，超过80%的酶切产物可连接(连接体系：20-40 u T4 DNA连接酶/1 μg DNA，10% PEG)，超过80%的连接产物能重新酶切。

商业化同裂酶

采用REsearch™软件寻找同功酶。

双酶切

采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

甲基化影响

Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。

识别位点靠近PCR片段末端时的酶切效率

识别位点距离片段末端的碱基数
1	2	3	4	5
50-100

DNA 分子中识别位点的数量

Lambda	ΦX174	M13mp18/19	pBR322	puc18/19	pUC57
130	11	11	11	7	8
pTZ19R/U	pTZ57R	pBluescriptIIKS(-/+)	pBluescriptIISK(-/+)	pACYC177	pACYC184
9	9	8	8	15	11

注意事项：

底物为λ DNA (dam-) (#SD0021)。
重叠的Dam甲基化抑制MboIII酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm-菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
超过15倍过量酶切会导致星活性。
MboII切割后的DNA片段含有3’端单碱基突出，连接时比平末端困难。
MboII可能会吸附在切割的DNA分子上，从而改变DNA条带的电泳纯移率。为了避免出现非正常条带，上样电泳前，建议采用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理样本，或者在 DNA酶切产物中加入SDS并加热处理。