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ECORI, HC

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描述：

限制酶反应条件

具有100%活性的推荐缓冲液	优化的反应温度	Enzyme activity in Thermo Scientific buffers, %						Tango™ 缓冲液 : 双酶切
具有100%活性的推荐缓冲液	优化的反应温度	B (蓝色) 1X	G (绿色) 1X	O (橙色) 1X	R (红色) 1X	Tango™ (黄色) 1X / 2X		Tango™ 缓冲液 : 双酶切
EcoRI	37°C	0-20	NR	100	100*	NR	100	2X

* –星活性比5倍过量酶切(5 units x 1 hour)还强。

100%酶活性的反应条件

1X 缓冲液EcoRI：
50 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0.02% Triton X-100, 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。

保存缓冲液

EcoRI保存在：
10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.15% Triton X-100和50%�(v/v)甘油。

连接和重新酶切

50倍EcoRI过量酶切后，超过95%的酶切产物可以连接和重新酶切。

琼脂糖包埋DNA酶切

至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。

商业化同裂酶

采用REsearch™软件寻找同功酶。

双酶切

采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

兼容性末端

XapI, MunI, TasI。

甲基化影响

Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 可能重叠 – 部分影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 不影响。

甲基化类型	序列	切割效果
CpG	5'...m5C GAATTm5C G...3' 3'... Gm5CTTAA Gm5C...5'	部分影响
EcoBI (TGA(N)₈TGCT)	5'...TGm6AATTC(N)₄ TGCT...3' 3'...AC TTAAG(N)₄m6ACGA...5'	不阻止酶切

识别位点靠近PCR片段末端时的酶切效率

识别位点距离片段末端的碱基数
1	2	3	4	5
50-100

DNA 分子中识别位点的数量

Lambda	ΦX174	M13mp18/19	pBR322	puc18/19	pUC57
5	0	1	1	1	1
pTZ19R/U	pTZ57R	pBluescriptIIKS(-/+)	pBluescriptIISK(-/+)	pACYC177	pACYC184
1	1	1	1	0	1

注意事项：

低盐、过量酶切、pH>8.0或用Mn²⁺替代Mg²⁺都会导致星活性。