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Ph.D.-7 Phage Display Peptide Library Kit

 
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描述:

Kit Components:
Ph.D.™-7 Phage Display Peptide Library
E. coli K12 ER2738
Biotin
Streptavidin, lyophilized
 

概述:噬菌体展示是一种体外筛选技术。它可以将一系列多肽或蛋白质文库展示在噬菌体颗粒的外部,而编码这些蛋白的 DNA 则位于病毒颗粒内部(1-3)。利用展示蛋白与其编码 DNA 之间的这种物理联系,我们可以通过一种简单的称为“生物淘选”的体外筛选方法(4),快速筛选出给定靶分子(抗体、酶、细胞表面受体等)的亲和配体。最简单的淘选方法是(见图1):将展示不同多肽的噬菌体文库与固定在平板或小珠上的靶分子孵育,先洗去未结合的噬菌体,而后洗脱特异性结合的噬菌体。扩增洗脱下的噬菌体。重复上述结合洗脱过程,使展示了与靶分子结合的多肽序列的噬菌体分子富集。经过 3-4 轮筛选后,通过 DNA 测序或 ELISA 鉴定分子克隆。

NEB 提供 3 种随机肽库和供自制肽库所需的 M13KE克隆展示载体。这 3 种肽库包括 7 肽库(Ph.D.-7),12 肽库(Ph.D.-12)和受约束于二硫键的环 7 肽库(Ph.D.-C7C)。Ph.D.-C7C 随机肽库所展示的多肽两侧各加了一个半胱氨酸。噬菌体组装时经过氧化,形成环化的多肽。所有肽库的容量超过 20 亿个克隆。上述 3 种肽库表达的随机肽均在噬菌体次要包膜蛋白 pIII 的 N 端,故每一个病毒粒子可以表达 5 个拷贝。Ph.D.-7 和 Ph.D.-12 肽库表达的展示肽就是展示肽本身,不含有其它额外氨基酸,但是Ph.D.-C7C 表达的展示肽前含有 Ala-Cys。所有的肽库在展示肽和 pIII之间存在连接肽段(Gly-Gly-Gly-Ser)。

展示在噬菌体表面的随机肽库已被应用于多种领域,包括绘制抗原表位图谱(图2)、研究蛋白质与蛋白质相互作用及酶抑制剂,并且还用于发现 GroEL、HIV、半导体表面、小分子荧光团和药物的肽配基。通过对纯化的受体和完整细胞进行淘选,已经鉴定出了具生物活性的受体配基。通过体外淘选分离出来的具有细胞特异性的靶多肽,已成功地运用于该细胞基因的传递。应用本系统,也能鉴定霉菌孢子和细菌细胞的配基,如:在体内、外均可特异抑制炭疽霉素的多肽。此外,本系统还适用于体内淘选组织特异性多肽,将噬菌体注射到活体动物体内,采集相应的器官,然后再从中分离出具有组织特异性的噬菌体


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参考文献

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