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SignalSlide? Phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204) IHC Controls

 
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描述:

每个对照玻片包括福尔马林固定的、石蜡包埋的NIH/3T3细胞,细胞经过U0126 (1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis[2-aminophenylthio]butadiene) #9903或者TPA (12-O-Tetradecanoylphorbol-13-Acetate) #4174处理。这些细胞样本作为phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204)免疫染色的对照。U0126被认为是MEK1、MEK2的高选择性抑制剂。TPA能够诱导p44/42 MAPK的磷酸化。Western blot分析相同的细胞提取物,以验证U0126、TPA处理的效力。丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一个具有广泛保守性的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族,在许多细胞过程中起作用,比如细胞增殖、分化、运动和死亡。p44/42 MAPK (Erk1/2)信号转导通路能在应答各种胞外刺激后被激活,这些刺激因子包括有丝分裂原、生长因子和细胞因子(1-3),并且被研究者认为是诊断和治疗癌症的重要靶点(4)。受到刺激后,三个不同层次的蛋白激酶级联反应就连续被开启,这三个层次的分子包含MAPKKK(MAP3K)、MAPKK(MAP2K)、MAPK。多种p44/42 MAP3Ks已经被鉴定出来,包括Raf家族成员,以及Mos、Tpl2/Cot。MEK1、MEK2是该通路中主要的MAPKKs(5,6)。MEK1、MEK2通过分别磷酸化p44和p42蛋白的活化环内的Thr202/Tyr204位点和Thr185位点/Tyr187位点,从而激活p44、p42。目前已经鉴定出p44/42的一些下游靶点,包括p90RSK (7) 和下游转录因子Elk-1 (8,9)。双特异性(Thr/Tyr) MAPK磷酸酶家族成员DUSPs、MKPs (10),以及MEK抑制子如U0126、 PD98059,可以负调节p44/42。


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