SignalSilence? USP9X siRNA I

• 产品编号：CST-6308S      品牌：CST       原厂货号：6308S
• 产品分类：DNA和RNA纯化 > RNA干扰 > RNAi Oligos > siRNA
• 应用分类：

描述：

使用USP9X Antibody #5751 （上）或α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125（下）对分别转染100nM SignalSilence^® 对照siRNA（无偶联物）＃6568（-）、SignalSilence® USP9X siRNA I (+)的HeLa细胞提取物进行免疫印迹分析结果。USP9X#5751抗体证实USP9X的表达被沉默，而α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125抗体用于上样对照。

来自Cell Signaling Technology (CST)的SignalSilence^® USP9X siRNA可以帮助研究者通过RNA干扰特异性地抑制USP9X的表达，这种方法可以通过将双链RNA分子传递到细胞内从而使基因表达有选择的沉默。来自CST的所有的SignalSilence^® siRNA产品都是经过内部严格检测的，并且通过Western blot 分析证明确实能够减少目的蛋白的表达。通过三苯甲基分析每个碱基以监测寡核苷酸的合成，确保合适的配对效率。随后寡核苷酸通过亲和固相萃取法纯化。退火的RNA双链通过质谱分析来证实其精确的组成。每一批产品都通过质谱分析与前面的产品进行比较，来保证不同批次之间的最大一致性。泛素酶（UBEs）催化蛋白质泛素化，去泛素化酶（DUB）作用相反（1,2）。共有5个亚家族的去泛素化酶被发现，包括USP, UCH, OTU, MJD和JAMM酶。USP9X/hFAM是一个X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶亚家族去泛素化酶成员，含有一个非常保守的催化结构域，具有半胱氨酸肽酶活性，使其能够对泛素或者多泛素偶联分子进行切割。USP9X是果蝇fat-facets (faf)基因在 哺乳动物中的同源基因，而faf基因对于果蝇眼部发育和胚胎存活能力至关重要(3,4)。 尽管USP9X对于哺乳动物胚胎发育也非常重要(5-7)，但其底物分子的鉴定才刚刚开始。有多项证据表明，USP9X在表皮细胞极化过程中，通过去泛素化活性依赖的方式，提高粘附分子和紧密连接蛋白的稳定性，从而参与细胞与细胞之间接触形成。实际上，USP9X被发现与AF-6、β-catenin-E-cadherin复合体及EFA6有相互作用(8-11)。也有研究发现，USP9X是TGF-β/BMP信号级联途径不可或缺的成员，能够抑制TRIM33介导的SMAD4的单泛素化，从而调节TGF-β的响应(12)。最近，USP9X被发现在多种肿瘤中高表达，通过其去泛素化能力增加Mcl-1蛋白的稳定性, 使癌细胞的生存能力和抗化疗能力大大增加。这一证据提示，USP9X能够在滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤等恶性肿瘤中作为治疗对象(13)。

1. Nijman, S.M. et al. (2005) Cell 123, 773-86.
2. Nalepa, G. et al. (2006) Nat Rev Drug Discov 5, 596-613.
3. Huang, Y. et al. (1995) Science 270, 1828-31.
4. Huang, Y. and Fischer-Vize, J.A. (1996) Development 122, 3207-16.
5. Pantaleon, M. et al. (2001) Mech Dev 109, 151-60.
6. Noma, T. et al. (2002) Mech Dev 119 Suppl 1, S91-5.
7. Xu, J. et al. (2005) J Neurosci Res 80, 47-55.
8. Taya, S. et al. (1998) J Cell Biol 142, 1053-62.
9. Taya, S. et al. (1999) Genes Cells 4, 757-67.
10. Murray, R.Z. et al. (2004) Mol Biol Cell 15, 1591-9.
11. Théard, D. et al. (2010) EMBO J 29, 1499-509.
12. Dupont, S. et al. (2009) Cell 136, 123-35.
13. Schwickart, M. et al. (2010) Nature 463, 103-7.
14. Pérez-Mancera, P.A. et al. (2012) Nature 486, 266-70.
15. Cox, J.L. et al. (2014) Cancer Biol Ther 15, 1042-52.

原厂资料：

Source / Purification

Western blot analysis of extracts from HeLa cells, transfected with 100 nM SignalSilence® Control siRNA (Unconjugated) #6568 (-) or SignalSilence^® USP9X siRNA I (+), using USP9X Antibody #5751 (upper) or α-Tubulin (11H10) Rabbit mAb #2125 (lower). The USP9X Antibody confirms silencing of USP9X expression, while theα-Tubulin (11H10) Rabbit mAb is used as a loading control.

Description

来自Cell Signaling Technology (CST)的SignalSilence^® USP9X siRNA可以帮助研究者通过RNA干扰特异性地抑制USP9X的表达，这种方法可以通过将双链RNA分子传递到细胞内从而使基因表达有选择的沉默。来自CST的所有的SignalSilence^® siRNA产品都是经过内部严格检测的，并且通过Western blot 分析证明确实能够减少目的蛋白的表达。

Quality Control

通过三苯甲基分析每个碱基以监测寡核苷酸的合成，确保合适的配对效率。随后寡核苷酸通过亲和固相萃取法纯化。退火的RNA双链通过质谱分析来证实其精确的组成。每一批产品都通过质谱分析与前面的产品进行比较，来保证不同批次之间的最大一致性。

Directions for Use

CST推荐使用100 nM SignalSilence^® USP9X siRNA I 进行转染，48到72小时后对细胞进行裂解。转染步骤按照转染试剂说明书提供的步骤进行。遇到任何使用方面的问题，请随时联系CST。

Background

泛素酶（UBEs）催化蛋白质泛素化，去泛素化酶（DUB）作用相反（1,2）。共有5个亚家族的去泛素化酶被发现，包括USP, UCH, OTU, MJD和JAMM酶。USP9X/hFAM是一个X染色体连锁的泛素特异性蛋白酶亚家族去泛素化酶成员，含有一个非常保守的催化结构域，具有半胱氨酸肽酶活性，使其能够对泛素或者多泛素偶联分子进行切割。USP9X是果蝇fat-facets (faf)基因在 哺乳动物中的同源基因，而faf基因对于果蝇眼部发育和胚胎存活能力至关重要(3,4)。 尽管USP9X对于哺乳动物胚胎发育也非常重要(5-7)，但其底物分子的鉴定才刚刚开始。有多项证据表明，USP9X在表皮细胞极化过程中，通过去泛素化活性依赖的方式，提高粘附分子和紧密连接蛋白的稳定性，从而参与细胞与细胞之间接触形成。实际上，USP9X被发现与AF-6、β-catenin-E-cadherin复合体及EFA6有相互作用(8-11)。也有研究发现，USP9X是TGF-β/BMP信号级联途径不可或缺的成员，能够抑制TRIM33介导的SMAD4的单泛素化，从而调节TGF-β的响应(12)。最近，USP9X被发现在多种肿瘤中高表达，通过其去泛素化能力增加Mcl-1蛋白的稳定性, 使癌细胞的生存能力和抗化疗能力大大增加。这一证据提示，USP9X能够在滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤等恶性肿瘤中作为治疗对象(13)。

1. Nijman, S.M. et al. (2005) Cell 123, 773-86.
2. Nalepa, G. et al. (2006) Nat Rev Drug Discov 5, 596-613.
3. Huang, Y. et al. (1995) Science 270, 1828-31.
4. Huang, Y. and Fischer-Vize, J.A. (1996) Development 122, 3207-16.
5. Pantaleon, M. et al. (2001) Mech Dev 109, 151-60.
6. Noma, T. et al. (2002) Mech Dev 119 Suppl 1, S91-5.
7. Xu, J. et al. (2005) J Neurosci Res 80, 47-55.
8. Taya, S. et al. (1998) J Cell Biol 142, 1053-62.
9. Taya, S. et al. (1999) Genes Cells 4, 757-67.
10. Murray, R.Z. et al. (2004) Mol Biol Cell 15, 1591-9.
11. Théard, D. et al. (2010) EMBO J 29, 1499-509.
12. Dupont, S. et al. (2009) Cell 136, 123-35.
13. Schwickart, M. et al. (2010) Nature 463, 103-7.
14. Pérez-Mancera, P.A. et al. (2012) Nature 486, 266-70.
15. Cox, J.L. et al. (2014) Cancer Biol Ther 15, 1042-52.

注意事项：

Storage: USP9X siRNA I is supplied in RNAse-free water.
Aliquot and store at -20ºC.