pGEM?-T Vector System I

产品编号：A3600 品牌：promega 原厂货号：A3600
产品分类：克隆 > 克隆载体和克隆试剂盒 > 载体 > PCR克隆载体
应用分类：克隆及合成生物学 > TA克隆

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20 reactions

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其它组分：

pGEM®-T Vector【子货号：A362A，包装：1 x 1.2μg，，运保温度：-20℃】

Control Insert DNA【子货号：A363A，包装：1 x 12μl，，运保温度：-20℃】

2X Rapid Ligation Buffer【子货号：C671A，包装：1 x 200μl，，运保温度：-20℃】

T4 DNA Ligase【子货号：M180A，包装：1 x 100u，，运保温度：-20℃】

描述：

pGEM^® -T 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。pGEM^®-T载体是通过EcoRV 酶切pGEM^®-5Zf(+) 载体，并在两个3`末端加入胸腺嘧啶构建的。pGEM^®-T 载体插入位点3`-T 突出端可极大提高PCR 产物的连接效率，因为3`-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为某些热稳定性聚合酶产生的PCR 产物提供匹配碱基。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3` 端加上一个脱氧腺苷酸聚合物。

pGEM^® -T 载体多克隆区T 突出端的两侧均有BstZI 酶切位点，使用BstZI 单酶消化即可释放插入片段。也可选用适当的双酶消化释放插入片段。pGEM^® -T载体系统II 除了pGEM^® -T 载体系统I 所有成分外，还包括JM109 感受态细胞。

pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体系统可用于PCR产物的克隆。这两种载体是通过 EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM® -T Easy载体，并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率，因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为热稳定性聚合酶产生PCR产物提供匹配碱基。这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸混合物。 pGEM®-T和pGEM®-T Easy高拷贝数载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，其侧翼和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base®系统（产品目录号#E5750）产生一系列巢式缺失体。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点，采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-T Easy 载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。而pGEM®-T 载体多克隆区只有一种这样的酶切位点BstZⅠ。这两种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体含有丝状噬菌体f1复制起始子，可用于制备单链DNA

产品	包装	目录号
pGEM®-T 载体系统Ⅰ	20个反应	A3600
包括：
1.2µg pGEM®-T 载体(50ng/µl)
12µl 插入DNA对照（4ng/µl）
100 U T4DNA连接酶
200µl T4DNA连接酶的2×快速连接缓冲液
1 操作手册

特点:

快速连接：使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。

蓝/ 白筛选：载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子，分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。

f1 复制起始位点：可用于制备单链DNA。

原厂资料：

The pGEM®-T Vector Systems are convenient systems to clone PCR products. The pGEM®-T Vector is prepared by cutting the pGEM®-5Zf(+) Vector with EcoRV and adding a 3´ terminal thymidine to both ends. These single 3´-T overhangs at the insertion site greatly improve the efficiency of ligation of a PCR product into the plasmid by preventing recircularization of the vector and providing a compatible overhang for ligation of PCR products generated by thermostable polymerases that add a single deoxyadenosine, in a template-independent fashion, to the 3´-ends of amplified fragments.

The multiple cloning site is flanked by recognition sites for the restriction enzyme BstZI, allowing release of the insert by a single-enzyme digestion. Alternatively, a double digestion may be used to release the insert from the vector. The pGEM®-T Vector System II contains JM109 Competent Cells in addition to all of the pGEM®-T Vector System I components.

Features - Benefits

Rapid Ligation: The 2X Rapid Ligation Buffer provided allows reactions to be completed in 1 hour at room temperature.
Blue/White Screening: T7 and SP6 RNA polymerase promoters flank a multiple cloning region within the α-peptide coding region for β-galactosidase. Insertional inactivation of the α-peptide allows recombinant clones to be directly identified by color screening on indicator plates.
f1 Origin of Replication: Allows preparation of single-stranded DNA.

Applications

For more information, see the Cloning and PCR chapters of the Protocols & Applications Guide.

注意事项：

1．在使用pGEM®-T 和pGEM®-T Easy 载体连接时只能使用本系统提供的

Promega 公司T4 DNA连接酶。其他商用的T4 DNA连接酶可能具有外切

酶活力，造成载体的末端胸腺嘧啶被除去。

2．２×快速连接缓冲液含有ATP，在温度波动时ATP易降解。可将缓冲液分

装成一次用量的小管，这样可避免反复冻融及经常的温度变化。

3．在每次使用２×快速连接缓冲液时一定要用混悬器混匀。

4．长孵育时间可增加转化子的数目，一般4℃孵育过夜可得到更多的转化子。

5.一定要使用高效率的感受态细胞（1×10⁸cfu/µg DNA）进行转化，建议使用JM109 高效感受态细胞（产品目录号：L2001）