pGEM?-T Easy Vector System I

• 产品编号：A1360      品牌：promega       原厂货号：A1360
• 产品分类：克隆 > 克隆载体和克隆试剂盒 > 载体 > PCR克隆载体
• 应用分类：克隆及合成生物学 > TA克隆

其它组分：

描述：

pGEM® -T Easy 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。它除了具有pGEM® -T 载体系统(Cat.# A3600,A3610) 所有的优势外，在插入位点两侧分别有EcoRI 和NotI 酶切位点，便于通过选择单酶切释放插入的DNA。pGEM® -T Easy载体系统II 除了pGEM® -T Easy载体系统I 所有成分外，还包括JM109 感受态细胞。

特点:

灵活：pGEM®-T Easy 载体多克隆位点两侧分别有BstZI, EcoRI和NotI 酶切位点，便于通过选择单酶切释放插入的DNA。

快速连接：使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。

蓝/ 白筛选：载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子，分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。

f1 复制起始位点：可用于制备单链DNA。

pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体系统可用于PCR产物的克隆。这两种载体是通过 EcoRⅤ酶切pGEM®-5Zf(+)和pGEM® -T Easy载体，并在3’末端加入胸腺嘧啶构建的。插入位点3’-T突出端可提高PCR产物的连接效率，因为3’-T突出端可以防止载体的自身环化，并且为热稳定性聚合酶产生PCR产物提供匹配碱基。这些聚合酶常常以不依赖模板方式在扩增产物的3’端加上一个脱氧腺苷酸混合物。   pGEM®-T和pGEM®-T Easy高拷贝数载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，其侧翼和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活允许在指示培养基用颜色直接筛选重组克隆。另外这两个载体的多克隆位点区的限制性酶切位点适用于采用Promega公司Erase-a-Base®系统（产品目录号#E5750）产生一系列巢式缺失体。   
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体的多克隆位点区含有一些这样的限制性酶切位点，采用这些酶进行单酶切消化即可释放插入片段。如pGEM®-T Easy 载体多克隆区的EcoRⅠ、BstZⅠ和NotⅠ酶切位点。而pGEM®-T 载体多克隆区只有一种这样的酶切位点BstZⅠ。这两种载体也可选用适当的双酶切消化释放插入片段。  
pGEM®-T和pGEM®-T Easy 载体含有丝状噬菌体f1复制起始子，可用于制备单链DNA 

原厂资料：

 The pGEM®-T and pGEM®-T Easy Vector Systems are convenient systems for the cloning of PCR products. The vectors are prepared by cutting the pGEM®-5Zf(+) and pGEM®-T Easy Vectors, respectively, with EcoR V and adding a 3´ terminal thymidine to both ends. These single 3´-T overhangs at the insertion site greatly improve the efficiency of ligation of a PCR product into the plasmids by preventing recircularization of the vector and providing a compatible overhang for PCR products generated by certain thermostable polymerases. These polymerases often add a single deoxyadenosine, in a template-independent fashion, to the 3´-ends of the amplified fragments.
The high copy number pGEM®-T and pGEM®-T Easy Vectors contain T7 and SP6 RNA polymerase promoters flanking a multiple cloning region within the alpha-peptide coding region of the enzyme beta-galactosidase. Insertional inactivation of the alpha-peptide allows recombinant clones to be directly identified by blue/white screening on indicator plates.
The pGEM®-T and pGEM®-T Easy Vector Systems include a 2X Rapid Ligation Buffer for ligation of PCR products. Reactions using this buffer may be incubated for 1 hour at room temperature. The incubation period may be extended to increase the number of colonies after transformation.

注意事项：

• PCR产物的T-A克隆
• 分子克隆