BAC-TO-BAC C-HIS TOPO EXP SYS COMBO KIT

产品编号：A11100 品牌：invitrogen 原厂货号：A11100
产品分类：蛋白质表达与纯化 > 蛋白质表达系统 > 昆虫表达系统
应用分类：蛋白质研究 > 蛋白质表达 > 昆虫表达 > 杆状病毒表达系统

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描述：

Bac-to-Bac ®杆状病毒表达系统 (Bac-to-Bac® Baculovirus Expression) 可生成能在昆虫细胞中高水平表达蛋白质的杆状病毒。其通过在 E. coli 中的位点特异性转座生成重组病毒，而非通过昆虫细胞中的同源重组。最新消息：pFastBacTOPO® 载体!

可靠和快速的蛋白表达
Bac-to-Bac® 杆状病毒表达系统 (Bac-to-Bac® Baculovirus Expression System) 比传统的杆状病毒表达更快速，更轻松，并且能保持高水平的蛋白表达。 Bac-to-Bac® 通过在 E. coli 的位点特异性转座生成重组的杆状病毒，而不是昆虫细胞内同源重组。 Bac-to-Bac® 杆状病毒表达系统在学术文献中获得高度评价。从 2000 年起每年约 100 篇引文！

传统的杆状病毒系统需要纯化和扩增初始的低滴度病毒上清。这需要进行耗时的噬斑分析。然而，Bac-to-Bac® 的 pFastBac™ 载体与亲代 Bacmid 在 DH10Bac™ E. coli 感受态细胞中重组，形成表达 Bacmid。将 Bacmid 转染到昆虫细胞，第一次转染即可快速生成高滴度的纯重组杆状病毒颗粒。可以节省数周的宝贵时间。在第十日收集纯 P2 杆状病毒原液，无需繁琐的噬斑分析（参见图 1）

高表达、易筛选
pFastBac™ 利用强大的多角体蛋白启动子在 Sf9、Sf21 和 High Five™ 等多种昆虫细胞系中实现高水平表达。
现在 Bac-to-Bac® 的 pFastBac 载体也能以 pFastBacTOPO® 载体的形式提供。pFastBacTOPO® 载体为 Blunt® TOPO® 载体，附有便于进行克隆和进行 pFastBac/GOI 扩增的 Mach1™-T1R E. coli。这种新载体可以：

• 利用 Accuprime™ Pfx SuperMix 等保真度最高的 PCR 酶扩增目的基因 (GOI) 。

• TOPO® 可在短短 5 分钟内将平端 PCR 产物克隆到新载体中！

• 在氨苄青霉素选择性平板上涂布 8 小时后即可观察到克隆，因为 Mach1™-T1R E. coli 细胞的倍增时间比其它标准克隆菌株短。

• 利用 Bac-to-Bac® N-His TOPO® 克隆或表达试剂盒可生产具有 TEV 切割位点的 N- 端 His 融合蛋白，因此可利用镍螯合树脂蛋白酶（Invitrogen’ 的 ProBond™ 纯化系统）纯化，并借助常用的 Invitrogen’ AcTEV™ 蛋白酶生产天然蛋白。

新载体将 TOPO® 克隆技术和广受赞誉的 Bac-to-Bac® 杆状病毒表达功能相结合，实现轻松克隆和高水平蛋白表达。
提供集成到克隆和表达试剂盒的 pFastBacTOPO® 载体。

注意事项：

Kit content for Bac-to-Bac® N-His TOPO® Expression kit (For details see the manual)
• Vector Kit for 20 topo cloning reactions:
o pFastBac⁄NT-TOPO® Vector containing the N-terminal His-Tag and TEV cleavage site.
o pFastBac⁄NT-Gus Control Plasmid (Control expression vector)
o Other reagents supplied: 10x PCR, dNTP Mix, Salt Solution, Sterile Water, Control PCR template, Polyhedrin Forward Primer, SV40 pA Reverse Primer
• Kit containing competent cells (20 reactions):
o One Shot® Mach1-T1R Chemically Competent E. coli
• MAX Efficiency® DH10Bac™ Competent E. coli for 20 reactions (4 kits with 5x 0.1 ml each)
• 1 ml Cellfectin® II Reagent
Vector kit: store at -20°C
One Shot® Mach1-T1R Chemically Competent E. coli: store at -80°C
MAX Efficiency® DH10Bac™ Competent E. coli: store at -80°C
Cellfectin® II Reagent: store at +4°C