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描述:
ViralSEQ™ Mouse Minute Virus (MMV) Detection Assay 为您提供整合式的样本制备及实时定量PCR Assay,用于检测细胞培养样本中的鼠细小病毒(MMV)。
来自鼠细小病毒污染的威胁 鼠细小病毒污染对于中国仓鼠卵巢细胞和小鼠骨髓瘤细胞的培养生产过程是一种潜在的威胁。在过去的20年里,多种细胞培养生产设备都曾受到这种病毒污染的负面影响。现在,基于实时定量PCR的一种快速检测方法让我们能够对培养生产过程实施进程中监测,帮助我们尽早发现污染事件。 Applied Biosystems® ViralSEQ™ MMV Detection Assay 是一种基于DNA纯化和实时定量PCR的整合式检测方法,用于在多种样本类型中快速、高灵敏度地检测鼠细小病毒。使用 PrepSEQ™ 磁珠从样本中分离病毒DNA。使用 TaqMan® 实时定量PCR技术进行高灵敏度高特异性的病毒DNA检测。Assay还含有专利性的阳性对照分子,从而消除了因待检样本无意中受到阳性对照污染而产生假阳性结果的可能。 发现所有已知的鼠细小病毒 属于细小病毒科的鼠细小病毒是一种无包被病毒,直径约20纳米。鼠细小病毒含有一条长度约5000个碱基的单链DNA。NCBI数据库中报告了4种鼠细小病毒毒株 (i, p, m, and c)和7种基因组序列。 ViralSEQ™ MMV Detection Assay 就是为帮助检测所有已知毒株和基因组而设计的。 快速出结果,便于进行常规的进程中检测 ViralSEQ™ MMV Detection Assay 的操作流程简单容易,4小时内出结果(图1)。Assay可用于完成常规的进程中检测,使整个细胞扩增过程中能够进行多种鼠细小病毒检测。试验快速、用时短,以便可以尽早发现鼠细小病毒污染,并帮助快速估计污染范围(如检查生物反应器、相关的数批或数群、原材料及设备)。这样,便可以迅速控制范围性污染事件,并隔离受影响的设备区域和/或疑似受污染的原材料。此外,快速实时定量PCR检测可用于确认污染是否已排除,并在继续进行细胞培养之前对病毒DNA是否已去除进行核实。多功能的操作规程也适用于检测非典型的样本,包括样本拭子、取样器及探针。 ViralSEQ™ MMV Detection Assay 简化了监测过程——为早期发现可能发生的再次污染而进行的监测过程(图2)。 差别性的阳性对照 ViralSEQ™ MMV Detection Assay 还含有鼠细小病毒差别性的阳性/提取物对照,这是一种含有鼠细小病毒DNA序列的质粒DNA,可被鼠细小病毒检测assay (FAM™ 探针)识别。在试验的样本制备和检测部分,这一对照物(图3)都设计用于模仿鼠细小病毒DNA的行为。它还被整合了一条额外的探针(VIC® 探针) 连接序列。PCR反应中出现的 FAM™ 及 VIC® 信号都可用于从鼠细小病毒 (FAM™) 和对照DNA (FAM™ 和 VIC®)中区分出阳性检测结果。新型的对照方法让我们能够进行无风险的DNA加标对照试验, 消除了因待检样本意外地受到阳性对照DNA的交叉污染而产生假阳性检测结果的可能。 经证实的灵敏度和特异性 该Assay检测灵敏度很高,能够检测每轮PCR反应中低至10个拷贝的鼠细小病毒基因组DNA,即 0.002 TCID50。鼠细小病毒基因组DNA的10倍连续稀释分析显示该试剂盒动态范围宽、检验效率高(图4和5)。 表1 显示ViralSEQ ™ MMV Assay 对鼠细小病毒基因组DNA靶点具有特异性,且未与非相关DNA发生交叉反应 使用 PrepSEQ™ 1-2-3 样本制备试剂盒高效回收鼠细小病毒DNA PrepSEQ™ 1-2-3核酸提取试剂盒设计用于从中国仓鼠卵巢细胞培养物和牛血清等多种复杂的样本类型中一致高效地回收鼠细小病毒基因组DNA样本。 图6显示的是加标样本中提取的DNA 的Ct值与实时定量PCR反应扩增的非加标对照组的 Ct 值相等,证实了 PrepSEQ™ 1-2-3试剂盒能够高效地回收DNA。 快速细胞培养法计划 ViralSEQ™ MMV Detection Assay 是快速细胞培养法计划的一部分,用于简化基于哺乳动物细胞培养的生物制药生产过程中3种常见污染物的检测流程。该计划建立了生产效率和产品质量方面新的流程标准,在一个仪器平台上,结合“一步样本制备法”和基于实时定量PCR技术的试剂盒以检测支原体、囊泡病毒和鼠细小病毒的。
原厂资料:
注意事项:
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
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参考文献
本产品可用于的实验
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