DNA 聚合酶 I 是具有 5´-3´ 和 3´-5´ 脱氧核糖核酸外切酶活性的 DNA 聚合酶。 DNA 聚合酶 I 可掺入生物素化的核苷酸。
应用: 依赖于 DNase I 的切口平移 (1,2)。 cDNA 克隆中的第二链合成 (3)。 填补 5´ 突出端 (4)。
来源: 纯化自表达质粒所带 DNA 聚合酶 I 基因的大肠杆菌。
性能和质量测试: 脱氧核糖核酸内切酶分析;确定依赖于 DNase I 的切口平移的效率。
单位定义: 一个单位的酶量可以在 37°C 的反应体系中,使用模板引物在 30 分钟内向酸沉淀材料掺入 10 nmol 总脱氧核糖核苷酸。
单位反应条件: 反应物共 100 µl,包括 50 mM 磷酸钾 (pH 7.0)、6.7 mM MgCl2、1 mM 2-巯基乙醇、80 µg/ml 模板引物、32 µM dTTP、69 nM [3H]dTTP 和酶,温度为 37°C,时间 30 分钟。