5, 5二硫代双(2-硝基苯甲酸)5,5-Dithiobis-(2-Nitro-Benzoic Acid)

• 产品编号：0215012605      品牌：MP       原厂货号：0215012605
• 产品分类：生化和细胞分析 > 标签、标记试剂盒 > 硫醇反应荧光团，生物素及其他标记
• 应用分类：

描述：

3-Carboxy-4-nitrophenyl disulfide; Ellman's Reagent; DTNB
Crystalline
Reagent for determination of sulfhydryl groups, and cholinesterase assay.
Ref.: Deakin, H., et al., Biochem. J., 89: 296 (1963).

5,5'二硫代双(2-硝基苯甲酸）

    DTNB为Ellman试剂。它用于比色法测定生物样 品中巯基。它易溶于水。在巯基化合物的存在下，无色的DTNB将被转变成黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸。由于5-巯基-2-硝基苯甲酸在412 nm处具有最大吸收，DTNB的吸收光谱并不干扰巯基的测定。  

配置方法：

    准确称取0.198gDTNB用50mMNa₂HPO₄（pH＝7.0）配制成50ml溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用。应该注意的是配置缓冲、浓度，储存时要避免见光.

用途：测定蛋白质、多肽和组织中巯基的灵敏试剂。通常用于农残检测，它吸光度来反映酶的抑制率值，最终用来初步判断农药是否超标有机磷农药中毒的监测（胆碱酯酶测定）。 0.5mM-5mM可以灭活细胞表面的离子通道，2mM-5mM可以使细胞表面的二硫键异构酶（PDI）失活，DTNB本身不能通过细胞膜。

以半胱氨酸中自由巯基的定量检测方法为例，具体操作为：
1.试剂的配制：

① Tris-HCL 缓冲液（0.25M）：DDW 准确配制后，用盐酸调节pH 8.3；
② 半胱氨酸标准溶液（1mM）：准确称取0.017563g L- 半胱氨酸（175.63），用1mL 甲酸溶解，以DDW 定容至100mL；
③ DTNB（分子量：396.35）标准溶液（10mM）：准确称取0.198175g DTNB 用50mMNa2HPO4（pH＝7.0）配制成50mL 溶液，存放于棕色瓶中，于暗处低温保存备用；
④ DTNB 分析溶液（0.1mM）：由1 体积10mM DTNB 标准液加99 体积0.25M 的Tris 缓冲液配制而成，现用现配。
2.标准曲线的制作：

① 25℃条件下，用Tris 缓冲液稀释L- 半胱氨酸标准液，配成梯度的稀释液（5.0mL），其浓度分别为：0.00mM、0.025mM、0.05mM、0.1mM、0.15mM、0.2mM；
② 取上述各浓度溶液1mL 分别加入到5mL 预先恒温于25℃水中的DTNB 分析溶液，摇匀，准确静止10min，立即于波长412nm 处测定吸光度值（A），根据目的蛋白的吸光度在标准曲线上读出对应的浓度即可

原厂资料：