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实验名称：蛋白质、氨基酸和酶Ⅺ：硝酸盐还原

描述：

化能无机自养菌（通过化学氧化获得能量，以及无机物作为电子供体，二氧化碳作为主要能源）及许多化能有机自养菌（生长需要有机物。有机物作为碳源和能源）在厌氧呼吸时，以硝酸盐作为终电子受体。这个过程中，硝酸盐还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸。有些细菌具有能够将硝酸盐还原成铵离子或分子氨的酶类。

细菌还原硝酸盐的性质能够用来分离和鉴定细菌。例如，大肠杆菌只能将硝酸盐还原成亚硝酸盐，荧光假单胞菌能够将硝酸盐彻底还原成分子氨，表皮葡萄球菌不能以硝酸盐作为终末电子受体。

硝酸盐还原测试将细菌培养在含有0.5%硝酸钾的硝酸营养培养基试管中。培养后检测，检测培养基中是否产生气体和亚硝酸根离子。气体（CO₂和N₂混合物）来自柠檬酸循环（CO₂）和硝酸盐还原（N₂）。加入氨基苯磺酸和N,N-二甲基-1-萘胺可以检测培养基中的亚硝酸根离子。培养基中任何亚硝酸都将会和这些试剂反应，形成粉红或红色。

如果培养基无颜色变化，其可能性为：①细菌具有硝酸盐还原酶，也将亚硝酸进一步还原为铵或分子氮；②它们具有其他酶类，还原亚硝酸为铵；③硝酸盐没有被微生物还原。判断硝酸盐是否经亚硝酸盐还原，可以加少量锌粉或5～10滴的斑点测试硝酸盐试剂C到含有试剂的培养基中。锌能还原硝酸盐为亚硝酸盐。如果加入锌后，出现了粉色或红色，则证明硝酸盐未被细菌还原为亚硝酸盐。如果无红色出现，培养基中的硝酸盐就已经从亚硝酸盐中被还原成铵或分子氮。