描述:
反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。
1. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界(左边界、右边界均可)和酶切位点附近设计引物P1、P2;
2. 回收DNA,T4连接酶连接,使酶切后的DNA片段环化;
3. 回收连接后的DNA,用引物P1、P2做PCR,就可扩增到两端为T-DNA插入序列,中间为侧翼序列的片段。
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