描述:
从严格的定义讲,原位PCR应该指以DNA为起始物,在原位对待定DNA序列进行扩增的聚合酶链反应。随着PCR技术的发展,出现了以mRNA为起始物,通过反转录合成靶序列的CDNA,然后以CDNA为模板施行聚合酶链式反应扩增,借以检测细胞内mRNA靶序列的原位反转录PCR。此项技术也被归人广义的原位PCR之列。原位再生式序列复制反应,是以mRNA为模板,通过逆转录酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶活性,以RNA/CDNA和双链CDNA为中间体,直接扩增RNA靶序列的一项技术。虽然再生式序列复制反应的扩增机理与聚合酶链反应不同,但两者亦有联系,具有一定的相关性,都属于特殊基因序列的扩增技术,故在此一并叙述。根据在扩增反应中所用的三磷酸核昔酸原料或引物是否标记,原位PCR可分为直接法和间接法两大类。
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