描述:
cDNA(Complementary DNA)是以mRNA为模板,在反转录酶作用下合成的互补DNA,它的顺序可代表mRNA序列。cDNA文库的构建是指将cDNA与克隆载体DNA体外重组,然后去转化克隆载体DNA的宿主细胞,从而得到一群含重组DNA的细菌或噬菌体克隆的过程。这些序列来自并代表一定组织或细胞类型特定发育或分化阶段的整个mRNA群体。
过程可分为六个阶段:
阶段1:反转录酶催化合成cDNA第一链
阶段2:cDNA第二链的合成
阶段3:cDNA的甲基化
阶段4:cDNA与连接子连接及连接后cDNA的过滤分离
阶段5:cDNA与载体的重组连接、重组DNA的体外包装和转染
阶段6:cDNA文库的扩增
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